تحضير تعليق ECM: تقنية للحصول على تعليق متجانس من المصفوفة خارج الخلية المشتقة من الأنسجة

تتكون المصفوفة خارج الخلية أو ECM ، وهي شبكة دعم معقدة في الأنسجة ، من البروتيوغليكان والبروتينات.

للحصول على ECM متجانس ، ابدأ بأخذ كمية مقاسة من مسحوق ECM منزوع الخلايا في أنبوب. الآن ، أضف عازلة محمضة إلى الأنبوب لتشكيل تعليق ECM.

في الوقت نفسه ، في أنبوب آخر ، قم بإذابة ألفا أميليز - إنزيم حال للسكر - في نفس المخزن المؤقت المحمض. يسهل الرقم الهيدروجيني الحمضي لهذا المخزن المؤقت النشاط الأمثل لإنزيم ألفا أميليز.

بعد ذلك ، استكمل الأنبوب الذي يحتوي على تعليق ECM بمحلول إنزيم ألفا أميليز. احتضان الأنبوب مع التحريض المستمر. يعمل ألفا أميليز على تحلل الجليكان - شقوق الكربوهيدرات - الموجودة في البروتيوغليكانات.

جهاز طرد مركزي لتكوير جزء ECM الغني بالبروتين ، تاركا الجليكان المهضوم والإنزيمات المستهلكة في المادة الطافية. تخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الحبيبات في محلول كلوريد الصوديوم. تستخرج أيونات الكلوريد البروتينات من حبيبات ECM إلى المعلق. جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية المحتوية على كلوريد الصوديوم.

بعد ذلك ، أضف حمض الخليك إلى حبيبات ECM المحتوية على البروتين. يعمل حمض الخليك على إذابة مجاميع بروتين ECM وإلقائها في حالة تعليق.

استخدم الخالط للحصول على تعليق ECM موحد. قم بتخزين نظام التعليق المتجانس ECM عند 4 درجات مئوية لمزيد من التحليل النهائي.

قم بوزن 250 مللي