تصنيع الرغوة المشتقة من المصفوفة خارج الخلية عن طريق التجميد بالتجميد: إجراء لتوليد سقالات بيولوجية من ECM للأنسجة منزوعة الخلايا

الرغوة المشتقة من ECM عبارة عن سقالات مسامية للغاية تم الحصول عليها باستخدام المصفوفة خارج الخلية - وهو مكون غير خلوي في البيئة المكروية للأنسجة.

لتصنيع رغوة مشتقة من ECM ، ابدأ بأخذ تعليق متجانس من مسحوق ECM فائق النعومة في أنبوب. احتضان التعليق عند درجة حرارة دافئة مع تحريض مستمر لمنع تكتل ECM.

بعد ذلك ، باستخدام حقنة ، انقل تعليق ECM المسال إلى القالب المطلوب. قم بتبريد القالب طوال الليل حتى يتصلب ECM. تصلب ECM لتشكيل بنية شبكة ثلاثية الأبعاد.

أخيرا ، ضع القالب الصلب المحتوي على ECM في قارورة مجففة. قم بتوصيل القارورة بنظام تجفيف التجميد. داخل المجفف بالتجميد ، تتعرض العينة لدرجة حرارة شديدة البرودة وضغط منخفض. ينتج عن هذا تكوين بلورات جليدية في المساحات الخلالية لشبكة ECM.

في الوقت المناسب ، يرتفع ضغط ودرجة حرارة المجفف تدريجيا. تسهل هذه الظروف التسامي - وهي عملية تتحول فيها المادة الصلبة مباشرة إلى شكلها الغازي بدلا من الخضوع للذوبان.

تتبخر الأبخرة الغازية ، تاركة وراءها مساحات فارغة داخل شبكة ECM ، وبالتالي تولد سقالة مسامية مشتقة من ECM.

احتضان نظام التعليق ECM عند 37 درجة مئوية مع تحريك مستمر عند 120 دورة في الدقيقة حتى يصبح التعليق دافئا. ثم استخدم 0.2 مولار حمض الأسيتيك لتخفيف معلق العينة إلى التركيز المطلوب. باستخدام حقنة 3 ملليلتر وإبرة 18G ، املأ القالب المطلوب بتعليق ECM.

يمكن تصنيع الرغوة في مجموعة من الأشكال الهندسية اعتمادا على شكل القالب. قم بتغطية القوالب وتجميدها عند 20 درجة مئوية تحت الصفر أو 80 درجة مئوية تحت الصفر. ثم ضع القوالب في قارورة مجففة. قم بتوصيل القارورة بنظام مجفف التجميد في المختبر وجفف القوالب لمدة 24 ساعة أو حتى تجف تماما.