موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:13 دقيقة • April 30th, 2023
الناقلات الدقيقة عبارة عن مصفوفات دعم كروية بحجم ميكرون مع مسام مترابطة توفر سطحا واسعا لارتباط الخلايا ونموها.
لتصنيع مصفوفة خارج الخلية أو ناقلات دقيقة مشتقة من ECM ، ابدأ بتعليق موحد لمسحوق ECM ناعم. قم بتحميل التعليق في حقنة متصلة بمجموعة التسريب. قم بتأمين المحقنة على مضخة حقنة. ضع الإبرة عموديا فوق قارورة مبردة على مسافة مناسبة.
الآن ، قم بتوصيل الإبرة بالطرف الموجب لمصدر طاقة عالي الجهد. قم بتوصيل شريط رقائق الألومنيوم المطوي على حافة القارورة وقم بتوصيله بطرف التأريض لإكمال الدائرة.
بعد ذلك ، املأ النيتروجين السائل في القارورة مع غمر الطرف الداخلي لشريط الألومنيوم. قم بتطبيق الجهد المطلوب واضبط مضخة الحقنة على معدل تدفق مناسب لبدء الرش الكهربائي. عندما يخرج نظام التعليق الموصل ECM من طرف الإبرة ، يتشوه شكله تحت تأثير المجال الكهربائي والتوتر السطحي ، مكونا مخروطا سائلا مدببا.
مع زيادات الجهد ، تنفجر نفاثات التعليق. ينقسم هذا في النهاية إلى قطرات أصغر مشحونة ويسقط في حمام النيتروجين السائل. يقوم النيتروجين السائل بتجميد القطرات الدقيقة على الفور ، مما يبلور جزيئات المذيبات بداخلها.
انقل القطرات الدقيقة المجمدة إلى أنبوب جديد. تجميد العينة. تساعد هذه الخطوة على إزالة جزيئات المذيبات المجمدة من العينة ، مما يؤدي إلى تكوين مسام في مكانها. قم بتخزين المسحوق الجاف للناقلات الدقيقة المسامية لمزيد من التطبيقات.
احتضن نظام التعليق ECM المبرد مع التحريك المستمر عند 100 دورة في الدقيقة طوال الليل. قم بتحميل 3 ملليلتر من نظام التعليق ECM في حقنة Luer-Lock سعة 3 مليلتر وقم بتوصيل مجموعة التسريب المجنح على تجويف المحقنة. قم بتأمين المحقنة داخل مضخة المحقنة. بعد ذلك ، اربط الإبرة بحامل معوجة وضع طرف الإبرة عموديا على مسافة 4 إلى 6 سم من أعلى قارورة ديوار منخفضة الشكل.
بعد ذلك ، قم بتوصيل قطب مشبك التمساح بطرف الإبرة ، مع التأكد أيضا من توصيل مشبك التمساح بالطرف الموجب لمصدر الطاقة عالي الجهد. قم بطي شريط رقائق الألومنيوم على حافة قارورة التفريغ. بعد ذلك ، قم بتوصيل قطب مشبك تمساح ثان بالحافة الخارجية للرقائق. قم بتوصيله بطرف المصدر الأرضي لمصدر الطاقة.
املأ قارورة ديوار بالنيتروجين السائل على بعد حوالي 1 سم من الأعلى بحيث يتم غمر ثلاثة أرباع الرقاقة. بعد ذلك ، اضبط مضخة الحقنة على معدل تسريب يبلغ 30 مل في الساعة ورش العينات بالكهرباء وفقا لبروتوكول النص. بمجرد اكتمال التسريب ، اسكب النيتروجين السائل الزائد بعناية من Dewar ، تاركا الناقل الدقيق معلقا في حوالي 25 مل من النيتروجين السائل لضمان بقائها مجمدة.
انقل الناقلات الدقيقة على الفور مع النيتروجين السائل إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 مليلتر عن طريق الصب في حركة واحدة سلسة. بعد ذلك ، استخدم مغرفة لجمع أي ناقلات صغيرة مجمدة متبقية في Dewar. أضفهم إلى أنبوب الطرد المركزي. للتحضير للتجميد ، قم بتغطية أنبوب الطرد المركزي بورق الألمنيوم المثقوب بثقوب صغيرة. ضع أنابيب الطرد المركزي المغطاة في قارورة مجففة. بعد ذلك ، قم بتوصيل القارورة على الفور بالمجفف بالتجميد وجفف العينات طوال الليل.