موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:22 دقيقة • April 30th, 2023
يحتوي الورم على جزء صغير من الخلايا الشبيهة بالخلايا الجذعية المعروفة باسم السكان الجانبيين. هذه الخلايا مقاومة للكيماويات ، مما يجعلها مسؤولة عن انتكاسة السرطان.
لعزل المجموعة الجانبية للخلايا السرطانية ، ابدأ بإضافة Hoechst - محلول صبغة فلورية - إلى القارورة التي تحتوي على تعليق الخلايا السرطانية. داخل الخلايا السرطانية الطبيعية ، تدخل جزيئات Hoechst إلى النواة وترتبط بالمنطقة الغنية ب A-T في الحمض النووي ، مما يؤدي إلى ارتفاع التألق في هذه الخلايا.
في المقابل ، تحتوي المجموعة الجانبية على تركيز عال من ناقلات ABC - مضخات التدفق التي تزيل جزيئات الصبغة بسرعة من الخلية. هذا التدفق النشط لجزيئات الصبغة يجعل السكان الجانبيين يتألقون بكثافة منخفضة.
الآن ، خذ قارورة أخرى من الخلايا السرطانية المعالجة ب Hoechst وأضف إليها فيراباميل. تعمل هذه القارورة كعنصر تحكم حيث يمنع فيراباميل ناقلات ABC. تتسبب هذه الخطوة في تقليل تدفق Hoechst وتحتفظ بالصبغة داخل الخلايا السكانية الجانبية.
بعد ذلك ، قم بمواجهة الخلايا في كلتا القواريرتين باستخدام يوديد البروبيديوم. يدخل يوديد البروبيديوم حصريا إلى نواة الخلايا الميتة ويتقاطع بين قواعد الحمض النووي. هذا يؤدي إلى ارتفاع التألق في الخلايا الميتة.
أخيرا ، قم بفرز الخلايا باستخدام فارز الخلايا المنشط بالفلورة أو FACS. يفصل FACS الخلايا السرطانية عالية الف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية