ميثيل ثيازوليل تيترازوليوم أو اختبار MTT: اختبار لوني لقياس مقاومة الأدوية عن طريق تحديد النشاط الأيضي في الخلايا السرطانية

يسمح مقايسة ميثيل ثيازول تيترازوليوم أو MTT بتقييم جدوى الخلية بناء على قياس نشاط التمثيل الغذائي الخلوي.

لبدء الفحص ، قم بإعداد مجموعة من التركيزات المتزايدة للدواء محل الاهتمام. أضف كميات متساوية من تركيزات الدواء المختلفة في آبار صفيحة متعددة الآبار.

بعد ذلك ، قم بتعليق الخلايا السرطانية الأبوية الحساسة للأدوية المرغوبة ومتغيرات مقاومة للأدوية في وسط مناسب ، كل منها في مجموعة من الآبار التي تحتوي على تركيزات مختلفة من الأدوية. احتضان اللوحة.

في الثقافة ، تكون الخلايا السرطانية الحساسة للأدوية حساسة لجزيئات الدواء ، مما يؤدي إلى موت الخلايا حتى عند التركيزات المنخفضة. على العكس من ذلك ، فإن الخلايا السرطانية المقاومة للأدوية غير حساسة لجزيئات الدواء ، مما يسهل بقائها وتكاثرها حتى عند تركيزات الأدوية الأعلى.

عالج الخلايا بمحلول MTT واحتضانه. MTT ، ملح تيترازوليوم موجب الشحنة ، يخترق بسهولة الخلايا النشطة الأيضية. داخل هذه الخلايا ، تقلل إنزيمات أوكسيدوريدوكتاز المعتمدة على NAD (P) H من ملح MTT إلى بلورات الفورمازان غير القابلة للذوبان في الماء ، والتي يتم نقلها إلى سطح الخلية.

الآن ، أضف محلول ذوبان مناسب في الآبار. تخلط جيدا لإذابة بلورات الفورمازان في محلول ملون. أخيرا ، استخدم قارئ الصفيحة الدقيقة لقياس امتصاص المحلول الملون ، مما يدل على نشاط التمثيل الغذائي الخلوي.

تظهر الآبا