موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:33 دقيقة • April 30th, 2023
تحاكي السقالات منزوعة الخلايا المشتقة من المصفوفة خارج الخلية لأنسجة معينة بيئتها المكروية الأصلية خارج الخلية. تحتفظ هذه السقالات بسلامتها الهيكلية وتكوينها الكيميائي الحيوي وتعمل كمنصات واعدة لهندسة الأنسجة.
لتحضير سقالة مريء خنزير منزوع الخلايا ، ابدأ بمريء خنزير مأخور طازج. قم بتقسيم المريء طوليا واشطفه بمخزن مؤقت مناسب لإزالة أي حطام. بعد ذلك ، قم بتأمين المريء بسطحه المخاطي ، الطبقة الأعمق ، متجها لأعلى.
افصل الغشاء المخاطي عن تحت الغشاء المخاطي الأساسي في أحد طرفي المريء. قم بتشريح المريء طوليا على طول النسيج الضام الرخوة للغشاء المخاطي المسمى الصفيحة المخصوصة لفصل سطح الغشاء المخاطي بالكامل عن تحت الغشاء المخاطي الأساسي.
علاوة على ذلك ، قم باستئصال المناطق القريبة والبعيدة من الغشاء المخاطي ، والتي تحتوي على كثافة أعلى من الغدد تحت المخاطية وطبقة صفيحة مخصوصة أكثر سمكا. قطع الأنسجة المخاطية إلى قطع متجانسة الحجم.
عالج الأنسجة بمحلول ملحي مفرط التوتر مكمل بالمضادات الحيوية. تساعد المضادات الحيوية على منع نمو البكتيريا. عند التركيز العالي للمذاب ، يخرج الماء من الخلايا ويسبب انكماشها. تساعد هذه الخطوة أيضا في الموت الخلوي والانفصال عن المصفوفة خارج الخلية.
الآن ، افصل الظهارة المخففة برفق عن الأنسجة الأساسية. اشطف المنديل بمحلول عازل لإزالة الحطام الخلوي. أخيرا ، احتضان الأنسجة في الجلسرين ، مما يسهل إزالة الخلايا من الأنسجة عن طريق تجفيف الخلايا وتحللها مع الحفاظ على سلامة الغشاء القاعدي.
لتحضير سقالات المريء الخنازير منزوعة الخلايا ، ابدأ باستخدام المقص وزوج من الملقط لقطع مريء الخنزير طوليا. بعد ذلك ، اغسل المريء في وعاء معقم سعة 180 مليلتر يحتوي على 100 مل من PBS المعقم لمدة 10 دقائق مع رج لطيف لإزالة أي حطام.
أثناء شطف الأنسجة ، رش لوح تشريح الفلين بنسبة 70٪ من الإيثانول. عندما يجف الفلين ، قم بتثبيت المريء على السبورة مع وضع الجانب المخاطي لأعلى. الآن ، استخدم ملاقط معقمة لإمساك السطح المخاطي في أحد طرفي المريء وسحب الأنسجة بعيدا عن اللوح لفصل الغشاء المخاطي عن الغشاء المخاطي الأساسي.
بعد ذلك ، باستخدام شفرة مشرط معقمة ، قم بتشريح المريء طوليا على طول الصفيحة الخاصة ، وقم بإزالة المسامير مع تقدم التشريح للسماح برفع الغشاء المخاطي بعيدا. تخلص من الغشاء المخاطي السفلي ، واستخدم مشرطا لتقطيع الغشاء المخاطي المتبقي إلى قطع مربعة بطول 5 سنتيمترات. اغسل القطع في 150 مل من PBS المعقم مع تحريك لطيف كما هو موضح للتو.
بعد خمس دقائق ، انقل الأنسجة إلى وعاء سعة 180 مليلتر يحتوي على 150 مل من محلول كلوريد الصوديوم المولي المكمل بالمضادات الحيوية عند 37 درجة مئوية. بعد 72 ساعة ، انقل الأنسجة إلى 150 مل من PBS المعقم ، وعند هذه النقطة ستبدأ الظهارة في الانفصال بشكل واضح عن الأنسجة الأساسية.
استخدم ملقطا معقما وشفرة مشرط لإزالة الظهارة المنفصلة ، وضع الأنسجة المتبقية في وعاء جديد من 150 مل من PBS المعقم مع ثلاث غسلات لمدة خمس دقائق مع تحريك لطيف. يجب الآن تخزين الأنسجة في الجلسرين لمدة لا تقل عن أربعة أشهر لتعقيم السقالة بالكامل.