JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:14 د • April 30th, 2023
لتحضير أجزاء رقيقة من كلية الفأر ، أولا ، احصل على كلية فأر محصودة حديثا. انقل الكلية إلى ورق ترشيح وجففها لضمان الالتصاق الأمثل بحامل عينة الاهتزاز.
بعد ذلك ، قم بتركيب الكلى ، وجانب الحالب لأسفل ، باستخدام طبقة رقيقة من غراء cyanoacrylate المطبقة على قاعدة حامل عينة الاهتزاز ، وتأمين الكلية في وضع رأسي. انقل حامل العينة إلى صينية عازلة.
املأ الدرج بمخزن مؤقت مناسب لغمر السطح العلوي للكلية بالكامل. يحيط الحوض بحمام جليدي لمنع تلف الأنسجة من تراكم الحرارة أثناء التقطيع. اضبط شفرة الاهتزاز على الزاوية والسرعة والسعة المناسبة. اضبط معلمة السماكة للحصول على أقسام الأنسجة بالسماكة المطلوبة.
أثناء التشغيل ، تهتز الشفرة بشكل جانبي وتتقدم ، تخترق عينة الأنسجة. تسمح الشفرة الاهتزازية بالتقطيع بضغط أقل وتقلل من تشوه الأنسجة ، مما يؤدي إلى إنشاء أقسام موحدة لأنسجة الكلى ذات أهمية مع الحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة.
وفي الوقت نفسه ، قم بتجميع صفيحة متعددة الآبار تحتوي على محلول عازل مبرد مناسب لتقليد الظروف الفسيولوجية للأنسجة. الآن ، انقل أقسام الأنسجة المقطعة إلى المخزن المؤقت. أخيرا ، قم بتخزين أقسام الأنسجة في درجة حرارة منخفضة حتى مزيد من التحليل النهائي.
استخدم ملقطا غير حاد للإمساك بالكلية المحضرة وإزالتها برفق من محلول KRB المثلج. ضع الكلى على الفور على ورق ماص لمدة 2 إلى 4 ثوان تقريبا لإزالة الرطوبة الخارجية الزائدة. قم بلف الكلية برفق عبر الورق الماص للتأكد من جفاف جميع جوانب الحمة بحيث يكون هناك التصاق مثالي للكلية بمرحلة الاهتزاز.
ضع على الفور طبقة رقيقة من غراء cyanoacrylate على قاعدة لوحة عينة الاهتزاز واستخدم ملقطا غير حاد لوضع الكلى ، جانب الحالب لأسفل ، على المنطقة المغطاة بالغراء. ضع ضغطا لأسفل برفق على الجزء العلوي من الكلى باستخدام الحافة المسطحة للملقط لمدة 10 إلى 20 ثانية تقريبا لتجفيف الغراء.
قم بتثبيت لوحة العينة بإحكام في الجزء السفلي من الدرج العازل واضبط مستوى محلول KRB بحيث يتم غمر الجزء العلوي من الكلية بالكامل. لتقسيم الاهتزاز التلقائي ، حدد وضعي البداية والنهاية لدورة قطع شفرة الاهتزاز ، على بعد 0.5 إلى 1 سم من الكلى ، للتأكد من تقسيم مستوى الكلى بالكامل.
ابدأ عملية القطع التلقائية ، مع التأكد من أن الشفرة تتلامس مع الكلى. باستخدام الملقط ، اجمع الأقسام التي يتم تحريرها من الكلى وانقلها على الفور إلى الآبار الفردية.