أخذ عينات الاستخراج المجهري للمرحلة الصلبة: تقنية قائمة على المسبار لاستخراج العينات من أنسجة الكسب غير المشروع

التخزين طويل الأمد لطعم الأعضاء على ملفه الأيضي ، وهو مؤشر على وظيفة الأعضاء ورفض الأعضاء في المرحلة المبكرة.

لعزل هذه المستقلبات ، ابدأ بأخذ مسبار صغير رقيق من الطور الصلب أو مسبار SPME مغطى بمادة ماصة متوافقة حيويا. اغمر المسبار في محلول تنظيف مائي كحولي لترطيب المادة الماصة المطلية وتخفيف أي شوائب مرتبطة.

تحريك المسبار لإزالة الشوائب. بعد ذلك ، ضع المسبار في محلول تنشيط وقم بتحريكه مرة أخرى. تقوم المواد الكيميائية الموجودة في محلول التنشيط بتعديل سطح المسبار ، مما يعزز إمكانات الامتزاز. اشطف المسبار بالماء وعقمه لإزالة الملوثات الميكروبية.

الآن ، أدخل المسبار المعقم والمنشط في طعم العضو بحيث تغطي مصفوفة الأنسجة سطح المواد الماصة بالكامل. تجذب المادة الماصة مستقلبات قطبية وغير قطبية حرة من الكسب غير المشروع ، مما يتيح الامتصاص على سطحه. اسحب المسبار واشطفه بالماء لإزالة أي أنسجة متبقية.

بعد ذلك ، ضع المسبار في محلول امتصاص يتفاعل مع المستقلبات الممتصة. حرك المسبار لفصل وحل المستقلبات التي تم التقاطها في محلول الامتصاص. أخيرا ، قم بإزالة المسبار ومعالجة خليط المستقلب الناتج للتحليل اللاحق.

ابدأ بتحضير خليط مكيف يتكون من 1 إلى 1 ميثانول وماء. ماصة 1 مليلتر من المحلول في كل قارورة زجاجية سعة 2 مليلتر وضع مسبار واحد في كل قارورة. حرك القوارير على محرض دوامة عند 1,200 دورة في الدقيقة لمدة 1 ساعة. بعد ذلك ، اشطف المجسات بماء LC-MS وقم بتعقيمها وفقا لبروتوكول التعقيم الجراحي القياسي أو في قسم المعالجة المعقمة.

عندما تكون جاهزا لاستخراج العينة ، افتح العبوة المعقمة وأدخل مجسين مباشرة في قشرة الكلى لمدة 10 دقائق لكل نقطة زمنية ، مع التأكد من تغطية طول الطلاء بالكامل بواسطة مصفوفة الأنسجة. تأكد من تتبع وقت أخذ العينات لكل مسبار. اسحب المسبار عن طريق سحبه من الأنسجة واشطف الطلاء على الفور بماء LC-MS لإزالة أي دم متبقي ، مع التأكد من شطفه بعيدا عن موقع الجراحة.

لنقل المجسات ، ضعها في قوارير منفصلة وأغلقها. ثم ضع القوارير في صندوق مملوء بالثلج الجاف أو النيتروجين السائل. قم بتخزين العينات على درجة حرارة سالب 80 درجة مئوية أو تابع الامتصاص على الفور.

تحضير محلول امتصاص يتكون من الأسيتونيتريل والماء لتحليل التمثيل الغذائي وآخر يتكون من الأيزوبروبانول والميثانول لتحليل الدهون. أضف 100 ميكرولتر من المحلول إلى الإدخالات في القوارير المسمى 2 مليلتر وضع مسبارا واحدا في كل قارورة. حرك القوارير عند 1,200 دورة في الدقيقة لمدة ساعتين. بعد ذلك ، قم بإزالة المجسات من القوارير واستمر في تحليل LC-MS.