تلطيخ الحمض النووي خارج الخلية: طريقة لتحديد الحمض النووي خارج الخلية في أقسام أنسجة FFPE
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:33 دقيقة • April 30th, 2023
تطلق الخلية المحتضرة جزءا من الحمض النووي خارج الخلية يسمى الحمض النووي خارج الخلية. لتلطيخ الحمض النووي خارج الخلية ، ابدأ بأخذ قسم أنسجة مثبت بالفورمالين ، أو FFPE ، على شريحة زجاجية. قم بتسخين الشريحة الزجاجية للمدة المطلوبة. هذا يسهل ربط الأنسجة على سطح الشريحة ويخفف البارافين المحيط.
اغمر الشريحة في سائل إزالة البارافين لإذابة طبقة البارافين تماما حول الأنسجة. بعد ذلك ، قم بغمس الشريحة في تركيزات متناقصة من الإيثانول لإعادة ترطيب الأنسجة منزوعة البارافين. بعد الجفاف ، اغمر الشريحة في محلول استرجاع المستضد المغلي. يكشف هذا العلاج عن الحلقات التي تم تغييرها أثناء عملية التثبيت.
قم بتراكب الشريحة بالأجسام المضادة الأولية واسمح لها بالارتباط بحواتم محددة غير مقنعة موجودة في الخلية. بعد ذلك ، أضف الأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات الفلورية ، والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية. اغمس الشريحة في محلول سودان الأسود لتقليل التألق الذاتي في الخلفية.
أخيرا ، ضع قطرة من وسط التثبيت المكمل ب DAPI فوق قسم المناديل وأغلقها بغطاء غطاء. احتضان للسماح لجزيئات DAPI بتلطيخ الحمض النووي. تصور قسم الأنسجة المحضرة باستخدام المجهر الفلوري. تساعد الحواتم المصنفة بالفلورسنت في الخلية في تمييز الحمض النووي النووي الموجود داخل الخلية عن الحمض النووي خارج الخلية.
لتلوين الحمض النووي خارج الخلية ، أولا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية