لماذا يعد اختبار الفرضية الصفرية مهماً للتحقق من تمايز الخلايا القدمية؟

يعد اختبار الفرضية الصفرية ضروريًا لتحديد ما إذا كانت التغيرات الملحوظة في خصائص الخلايا القدمية ناتجة عن بروتوكول التمايز أو بسبب تباين عشوائي، مما يدعم التحقق القوي من الأهداف في أبحاث الكلى.

كيف يتناسب عزل المتغيرات المستقلة في سير عمل تحويل الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSC) إلى خلايا足podocytes؟

يتيح عزل المتغيرات، مثل تكوين الوسط أو وقت الحضن، للفرق عزو نتائج التمايز تحديداً إلى تعديلات البروتوكول، مما يعزز التحسين وقابلية التكرار في مرحلة الاكتشاف.

ما الذي تتيحه قياسات الخلايا القدمية الكمية في فحوصات السمية الكلوية؟

يتيح التقييم الكمي لمورفولوجيا الخلايا الرجلاء وحيويتها إجراء مقارنة موضوعية لتأثيرات المركبات، مما يدعم اتخاذ قرارات قائمة على البيانات في فحص السمية الكلوية وتطوير المقايسات.

لماذا تعتبر متطلبات التكرار بالغة الأهمية في دراسات الخلايا الدبقية للقدم (podocyte) عبر الوظائف؟

تضمن عملية التكرار اتساق تمايز الخلايا القدمية ونتائج المقايسات عبر مختلف الفرق والتجارب، مما يسهل مشاركة البيانات الموثوقة وجهود البحث والتطوير التعاونية.

ما هي قدرات التحليل الإحصائي المطلوبة قبل تنفيذ مقايسة الخلايا القدمية (podocyte assay)؟

تتطلب عملية تحليل كفاءة التمايز، وقابلية تكرار المقايسة، وتأثيرات العلاج استخدام أدوات إحصائية قوية، وذلك لضمان استيفاء البيانات القائمة على الخلايا القدمية (podocyte) لمعايير البحث والتطوير المؤسسية لاتخاذ القرارات.

اشتقاق خلايا الكلى البشرية من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات: إجراء للتمايز الموجه لخلايا الكلى الناضجة من الخلايا الجذعية

JoVE Encyclopedia of Experiments

أبحاث السرطان

0 مشاهدات • 4:19 د • April 30th, 2023

يمكن إعادة برمجة الخلايا الناضجة لاستعادة حالتها غير المتمايزة والتكاثرية الشبيهة بالخلايا الجذعية. تسمى هذه الخلايا المعاد برمجتها بالخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات أو IPSCs. لتفريق الخلايا متعددة القدرات إلى خلايا متخصصة في الخلايا البودوية تشارك في ترشيح الفضلات من الكلى ، ابدأ بأخذ تعليق من IPSCs البشرية في وسط تحريض الأديم المتوسط.

انقل هذا التعليق إلى صفيحة ثقافة مطلية بمصفوفة الطابق السفلي واحتضنها. تسهل مصفوفة الطابق السفلي التصاق IPSCs في القاعدة. بعد ذلك ، تؤدي العوامل المحددة الموجودة في الوسائط إلى تمايز IPSCs إلى خلايا الأديم المتوسط ، وهي الخلايا السليفة للخلايا البودوية. استنشق وسائل الإعلام المستهلكة.

استكمل اللوحة بالحجم المطلوب من وسائط تحريض الأديم المتوسط الوسيطة واحتضانها لفترة طويلة. تؤدي هذه الخطوة إلى تمايز خلايا الأديم المتوسط إلى خلايا بودوس غير ناضجة. استبدل وسائط تحريض الأديم المتوسط الوسيطة بمحلول التربسين لفصل الخلايا الملتصقة عن اللوحة.

بعد ذلك ، جهاز الطرد المركزي لتكوير الخلايا. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على محلول التربسين وشظايا المصفوفة. أعد تعليق الحبيبات في وسط تحريض البودويت. انقل تعليق الخلية إلى لوحة ثقافة مطلية حديثا. احتضان للسماح بتطوير العديد من الإسقاطات الشبيهة بالقدم من الخلايا الوسيطة ، مما يؤدي إلى تكوين الخلايا الناضجة.

بعد العد ، أعد تعليق الخلايا إلى 1 في 10 إلى الخلايا الخامسة لكل مليلتر من تركيز وسط تحريض الأديم المتوسط واستنشاق محلول المصفوفة خارج الخلية من مصفوفة الغشاء القاعدي 2 الألواح المطلية. اشطف الألواح مرتين بوسط دافئ واخلط معلق الخلايا الجذعية متعدد القدرات الذي يسببه الإنسان مع ماصة لطيفة.

أضف 1 مليلتر من الخلايا إلى كل بئر من مصفوفة الغشاء القاعدي 2 المغلفة بألواح 12 بئر ورج الألواح برفق لتوزيع الخلايا بشكل متساو. ثم ضع اللوحة في حاضنة زراعة الخلايا. في الأيام من 2 إلى 15 من التمايز ، استبدل وسط تحريض الأديم المتوسط ب 1 مليلتر من وسط تحريض الأديم المتوسط الوسيط لكل بئر.

إذا لوحظ نمو كبير للخلايا واستنفاد سريع للعناصر الغذائية كما هو موضح في اصفرار الوسط ، فيمكن زيادة حجم وسط تمايز الأديم المتوسط الوسيط إلى 1.3 مل لكل بئر. في اليوم 16 من الثقافة ، اشطف خلايا الأديم المتوسط الوسيطة بوسط دافئ واحتضان الخلايا ب 500 ميكرولتر من 0.05٪ تريبسين-EDTA لكل بئر لمدة 3 دقائق عند 37 درجة مئوية.

عندما تبدأ الخلايا في الانفصال ، اكشط الخلايا باستخدام رافع الخلايا واخلط الخلايا برفق عن طريق سحب العينات. أوقف التفاعل بحوالي 2 مل من محلول تحييد التربسين لكل بئر وانقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلترا. ارفع الحجم إلى 50 ملليلتر مع وسيط وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي.

أعد تعليق وسط تحريض الحبيبات والخلايا البودوية عند 1 في 1 في 10 إلى الخلايا الخامسة لكل مليلتر من التركيز المتوسط وإضافة الخلايا إلى مصفوفة الغشاء القاعدي 2 الألواح المطلية. بعد ذلك ، قم بهز الطبق برفق للمساعدة في توزيع الخلايا بشكل متساو وضع الخلايا في الحاضنة لمدة تصل إلى 5 أيام.