عزل خلايا العضلات الملساء Detrusor: إجراء هضم إنزيمي للحصول على خلايا DSM من عينات المثانة البولية البشرية
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:45 دقيقة • April 30th, 2023
الخلايا الملساء البديلة ، أو DSM ، الموجودة داخل جدار المثانة البولية الوحدة الوظيفية الأساسية للمثانة. تسترخي هذه الخلايا لتسهيل تخزين البول في المثانة وتنقبض لإطلاق البول.
لعزل خلايا DSM ، ابدأ بأخذ عينة من المثانة البولية البشرية المحصودة. اغسل العينة لإزالة أي آثار للدم والحطام. بعد ذلك ، قم بتأمين الأنسجة بحيث يكون سطحها المخاطي متجها لأعلى. استئصال الدهون والأوعية الدموية والطبقة المخاطية لكشف طبقة العضلات الأساسية المبتروسور. ثم قم بتقطيع الأنسجة الخالية من الغشاء المخاطي إلى أجزاء صغيرة.
عالج شظايا الأنسجة بكوكتيل الهضم الذي يحتوي على غراء واحتضانه. غراء ، إنزيم محلل للبروتين ، يعزز هضم البروتينات في المصفوفة خارج الخلية التي تربط الخلايا معا وتبدأ في ارتخاء الخلايا في المصفوفة. الآن ، قم بإزالة المادة الطافية المحتوية على غراء.
أضف تعليق إنزيم الكولاجيناز إلى شظايا الأنسجة واحتضانه في درجة حرارة فسيولوجية. يكسر الكولاجيناز المصفوفة خارج الخلية ويسهل تفكك خلايا DSM. تساعد الحضانة في درجة الحرارة الفسيولوجية في الحفاظ على سلامة خلية DSM. تخلص من المادة المطفية المحتوية على الكولاجيناز.
اغسل شظايا الأنسجة بمحلول بارد مثلج لإزالة أي إنزيمات متبقية. ثم أعد تعليقها في المخزن المؤقت. قم بترتيورث شظايا الأنسجة المعالجة بالإنزيم برفق لضمان التفكك الكامل لأي خلايا غير مفرج عنها
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية