تحليل المشبك المثقوب بوساطة الأمفوتريسين-B: تقنية الفيزيولوجيا الكهربية لدراسة التيارات الأيونية في خلايا المثانة البولية
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:20 دقيقة • April 30th, 2023
تسمح تقنية المشبك المثقوب بالقياسات في الوقت الفعلي للتيارات الأيونية المرتبطة بنشاط القنوات الأيونية على خلايا مثل العضلات الملساء المثقبة ، أو DSM ، خلايا المثانة البولية.
للبدء ، قم بتحميل تعليق خلية DSM على غرفة زجاجية واحتضانها للسماح بالالتصاق الخلية. بعد ذلك ، أضف محلولا خارج الخلية يحتوي على أيونات رباعي إيثيل الأمونيوم والسيزيوم إلى الخلايا الملتصقة. تحجب هذه الكاتيونات قنوات البوتاسيوم على غشاء الخلية وتمنع تيارات البوتاسيوم المتداخلة.
بعد ذلك ، خذ ماصة مصقولة - أنبوب زجاجي مجوف رفيع يحتوي على قطب تسجيل متصل بمكبر للصوت. املأ الماصة الأمامية بمحلول داخل الخلايا وردم ملها بنفس المحلول ولكنه يحتوي على الأمفوتريسين-B، وهو مضاد حيوي مثقب غشائي
الآن ، اغمر طرف الماصة في محلول خارج الخلية الذي يحتوي على خلايا DSM. بعد ضبط الإمكانات والتيار على المستويات المناسبة، ادفع طرف الماصة باتجاه غشاء الخلية وراقب مقاومة القطب الكهربائي في نفس الوقت.
تشير الزيادة السريعة في قيمة المقاومة إلى أن طرف الماصة قد وصل إلى غشاء الخلية. الآن ، قم بتطبيق شفط لطيف على القطب الكهربائي لتشكيل ختم محكم يسمى ختم جيجا بين طرف الماصة وغشاء البلازما.
بعد تكوين الختم ، ينتشر الأمفوتريسين ببطء في الطرف ويثقب الغشاء ، مكونا مسام أيونية. بمجرد تحقيق التثقيب الأمثل ، تتحرك الأيونات بين الخلايا والقطب ، مما يول
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية