عزل الإكسوزوم: تقنية طرد مركزي فائق تعتمد على الكثافة باستخدام وسادة السكروز لفصل الإكسوسومات عن الوسائط المكيفة للخلايا المستزرعة

يتم إفراز الإكسوسومات - حويصلات بحجم نانو ومرتبطة بالغشاء تحمل جزيئات حيوية وظيفية - بنشاط بواسطة معظم أنواع الخلايا ويمكن عزلها من المواد الطافية لزراعة الخلايا في المختبر. لعزل الإكسوسومات ، أولا ، حصاد الوسائط الطافية أو التكييف من ثقافة الخلية ذات الأهمية. ستحتوي الوسائط التكييف على الإكسوسومات والبروتينات والحطام الخلوي والحويصلات.

الطرد المركزي الوسائط لحبيبات الحطام الخلوي. اجمع المادة الطافية المحتوية على الإكسوسوم وقم بتصفيتها من خلال مصافي الخلايا لإزالة الحويصلات الأكبر. انقل حجما معينا من الوسائط المفلترة إلى أنبوب جديد. بعد ذلك ، اخلطي التركيزات المناسبة من السكروز وأكسيد الديوتيريوم لتحضير وسادة السكروز - تدرج متقطع من السكروز.

أضف حجما معينا من محلول وسادة السكروز إلى الأنبوب المحتوي على الوسائط ؛ يشكل المحلول طبقة منفصلة في الأسفل. الآن ، قم بالطرد المركزي للأنبوب بسرعة عالية. تسهل وسادة السكروز هجرة الإكسوزومات من الوسائط إلى محلول السكروز مع الحفاظ على سلامة الإكسوزوم. تحتل ملوثات البروتين عالية الكثافة الواجهة بين محلول السكروز والوسائط.

انقل بعناية الجزء الأكبر من طبقة السكروز المحتوية على الإكسوسوم إلى أنبوب جديد مع مخزن مؤقت مناسب. جهاز طرد مركزي بسرعة عالية للحصول على حبيبات من الإكسوسومات المنقاة. تخلص من المادة الطافية المحتوية على السكروز مع أي ملوثات بروت