عزل الخلايا الكلوية الفئرانية: تقنية لعزل وتوليد الثقافة الأولية للخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية

لعزل الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية أو TECs ، ابدأ بأخذ كلية فأر معزولة حديثا في طبق بتري. انزع الكبسولة الكلوية - الطبقة الخارجية الرقيقة المحيطة بالكلى - وقم بإزالة النخاع أو الجزء الأعمق من الكلى ، تاركا القشرة التي تحتوي على النبيبات والخلايا الظهارية الأنبوبية.

افرم أجزاء الكلى المتبقية إلى قطع صغيرة واحتضانها في مخزن هضم دافئ يحتوي على إنزيم الكولاجيناز. يكسر الكولاجيناز بروتين الكولاجين الذي يربط الأنسجة الكلوية معا ، ويطلق الأنابيب الكلوية والخلايا الكلوية في حالة تعليق.

قم بتصفية المعلق لإزالة أنسجة الكلى غير المهضومة. بعد ذلك ، أضف وسائط الثقافة المبردة مسبقا إلى المرشح. تعمل درجة الحرارة المنخفضة على تحييد الكولاجيناز وتوقف هضم الأنسجة. يقوم الطرد المركزي بالترشيح بسرعة منخفضة للسماح للأنابيب الأكثر كثافة والخلايا الأنبوبية بالاستقرار بينما تظل أنواع الخلايا والشوائب الأخرى معلقة.

قم بإزالة هذا الجزء الطافي غير المرغوب فيه وأضف وسائط الثقافة لإعادة تعليق الحبيبات. بذر المعلق في طبق استزراع مغطى بالكولاجين واحتضانه. تلتصق الخلايا الأنبوبية الحرة بقوة بالكولاجين بينما تظل الأنابيب معلقة. زراعة فرعية لإزالة الأنابيب غير المتصلة والحصول على الثقافة الأولية للخلايا الظهارية الأنبوبية.

لمعالجة الكلى المحصودة ، قم أولا بإزالة الكبسولات الكلوية والنخاع. بعد ذلك ، افرم كلتا ا