عزل الخلايا الكلوية الفئرانية: تقنية لعزل وتوليد الثقافة الأولية للخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية

0 مشاهدات3:21 د • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لعزل الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية أو TECs ، ابدأ بأخذ كلية فأر معزولة حديثا في طبق بتري. انزع الكبسولة الكلوية - الطبقة الخارجية الرقيقة المحيطة بالكلى - وقم بإزالة النخاع أو الجزء الأعمق من الكلى ، تاركا القشرة التي تحتوي على النبيبات والخلايا الظهارية الأنبوبية.

افرم أجزاء الكلى المتبقية إلى قطع صغيرة واحتضانها في مخزن هضم دافئ يحتوي على إنزيم الكولاجيناز. يكسر الكولاجيناز بروتين الكولاجين الذي يربط الأنسجة الكلوية معا ، ويطلق الأنابيب الكلوية والخلايا الكلوية في حالة تعليق.

قم بتصفية المعلق لإزالة أنسجة الكلى غير المهضومة. بعد ذلك ، أضف وسائط الثقافة المبردة مسبقا إلى المرشح. تعمل درجة الحرارة المنخفضة على تحييد الكولاجيناز وتوقف هضم الأنسجة. يقوم الطرد المركزي بالترشيح بسرعة منخفضة للسماح للأنابيب الأكثر كثافة والخلايا الأنبوبية بالاستقرار بينما تظل أنواع الخلايا والشوائب الأخرى معلقة.

قم بإزالة هذا الجزء الطافي غير المرغوب فيه وأضف وسائط الثقافة لإعادة تعليق الحبيبات. بذر المعلق في طبق استزراع مغطى بالكولاجين واحتضانه. تلتصق الخلايا الأنبوبية الحرة بقوة بالكولاجين بينما تظل الأنابيب معلقة. زراعة فرعية لإزالة الأنابيب غير المتصلة والحصول على الثقافة الأولية للخلايا الظهارية الأنبوبية.

لمعالجة الكلى المحصودة ، قم أولا بإزالة الكبسولات الكلوية والنخاع. بعد ذلك ، افرم كلتا الكليتين إلى قطع صغيرة واحتضنهما في 10 مل من عازلة الهضم في فرن 37 درجة مئوية مع دوران لطيف لمدة 5 دقائق.

بعد الهضم ، قم بإزالة أي أنسجة غير مهضومة عن طريق تمرير المخزن المؤقت عبر مرشح 70 ميكرون. بعد جمع الأنسجة المهضومة ، أضف 10 مل من وسائط الثقافة لوقف الهضم. بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي لتعليق الأنسجة المفلترة عند 50 × جم لمدة 5 دقائق لتكسير الخلايا الأنبوبية. بعد ذلك ، انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد ، وأضف 5 ملليلتر من وسط الثقافة ، وكرر الطرد المركزي لجمع أي خلايا أنبوبية متبقية.

الآن ، قم بتعليق الحبيبات الأولى في 20 مل من وسائط الاستزراع وقم بطردها عند 50 × جم لمدة 5 دقائق لتنقية الخلايا المجمعة. تخلص من المادة الطافية. ثم أعد تعليق كلتا الكريات في 10 ملليلتر من وسط الاستزراع. بعد ذلك ، عد الخلايا الحية باستخدام تلطيخ Trypan Blue. بعد ذلك ، قم بزرع ما يصل إلى 10 ملايين خلية في طبق مغطى بالكولاجين بحجم 60 ملم واترك الخلايا الأنبوبية تلتصق طوال الليل.

09:00

ميكروديسيكشن شرائح الأنسجة الكلوية الأولية، وإدماج مع تكنولوجيا بناء رواية خالية من السقالة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:14

طريقة سيفينج فعالة لعزل Glomeruli سليمة من الفئران الكبار الكلي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:18

عزل وثقافة الخلايا العصبية الأولية وغليا من المثانة البولية الجرذ الكبار

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:06

العزلة والثقافة في خلايا كلوية المنشأ من منطقة من الفأر الجنينية الكلى

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:35

عزل الكبيبات: تقنية للحصول على كبيبات سليمة من كلية الفئران

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:43

الظهارية إعادة تعمير خلية وإعداد القوارض خارج الخلية مصفوفة السقالات للتنمية نسيج الكلى

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:30

تشريح وثقافة ماوس الجنينية الكلى

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:40

تحليل الجريان خارج الخلية عزل وتوصيف وإنتاجية عالية للماوس الأساسي كلوي أنبوبي الخلايا الظهارية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:32

تطوير الثقافات الأولية للخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية البشرية في أحادية الطبقات وظروف ثلاثية الأبعاد

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:06

عزل الخلايا الظهارية الأنبوبية البشرية القريبة الأولية واستخدامها في إنشاء نموذج فيزيولوجي مجهري للأنبوب الكلوي القريب

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026