حقن الحوض الكلوي الهيدروديناميكي: تقنية لتوصيل الحمض النووي مباشرة إلى خلايا الكلى في نموذج الفئران

لتوصيل الحمض النووي البلازميد مباشرة إلى خلايا الكلى الفأرية ، ابدأ بوضع فأر مخدر في وضع جانبي. قم بإعداد الماوس عن طريق إزالة الفراء الظهري من الجانب. حدد موقع الشق المناسب في الجناح الأيسر ، أسفل القفص الصدري.

قم بعمل شق صغير في الجلد وطبقات العضلات الأساسية. بعد ذلك ، قم بالضغط برفق على تجويف البطن لكشف الكلية من خلال موقع الشق. قم بإزالة الأنسجة الدهنية المتراكبة في العجان جزئيا لتصور الحوض الكلوي.

الآن ، خذ حقنة تحتوي على الحمض النووي البلازميد في مخزن مؤقت للتوصيل الهيدروديناميكي. أدخل الإبرة مباشرة في الحوض الكلوي - جزء مثلث متوسعة من الحالب في الكلى. حقن محلول البلازميد بسرعة بحيث يصل الحمض النووي مباشرة إلى الحمة الكلوية - الجزء الوظيفي من الكلى الذي يقوم بتصفية الدم.

يؤدي التوصيل السريع لحجم كبير من السوائل عبر الحوض الكلوي إلى بناء ضغط عال ، مما يخلق مساما عابرة في غشاء البلازما للخلايا المتني الكلوي. هذا يسهل دخول البلازميدات إلى الخلايا. في النهاية ، تغلق هذه المسام ، مما يحبس البلازميدات داخل الخلايا.

أخيرا ، اسحب الإبرة وأعد الكلية إلى تجويف البطن. خياطة الجلد وطبقات العضلات في موقع الشق.

ارتد قفازات جراحية معقمة وبدءا من جانب الشق ، امسح بمسحة جديدة من الكلورهيكسيدين / الكحول ثلاث مرات بحركة دائرية. الآن ، حدد موقع الشق. اقرص الجلد بالملاقط ، وباستخدام المقص ، قم بقص طبقة الجلد على بعد حوالي 1 سم من العمود الفقري أسفل القفص الصدري. قم بعمل قطع مركزي آخر أدناه في طبقة العضلات. حدد موقع الكلية ، ودون لمسها ، قم بتعريضها برفق من تجويف البطن عن طريق الضغط اللطيف الثابت على البطن بالأصابع.

في

بعض الأحيان يكون تعريض الكلى صعبا. ضع ضغطا برفق على البطن والعمود الفقري لتجنب إتلاف الطحال. إذا خرجت أعضاء أخرى غير الكلى ، فأعيدها برفق إلى تجويف الجسم باستخدام ملقط مغلق إذا لزم الأمر.

بعد ذلك ، افصل الكلية برفق عن الدهون المحيطة بما يكفي لتصور الحوض الكلوي ، والذي يمكن رؤيته على أنه نقطة بيضاء صغيرة. بعد تصور الحوض الكلوي ، استخدم ملقطا مغلقا للضغط على الجانب الأيمن من الكلية بحيث يظل الحوض الكلوي في الأفق. بعد ذلك ، أمسك حقنة الأنسولين المحملة باليد اليمنى عن طريق إمساكها بالتوازي مع سطح العمل وأدخل الإبرة بعناية في الحوض الكلوي.

بمجرد إدخال الإبرة ، قم بحقن المحلول بسرعة في غضون 3 ثوان. اترك الإبرة في مكانها لمدة 10 ثوان تقريبا لمنع التدفق العكسي للمحلول. بعد ذلك ، قم بإزالة الإبرة ببطء وحذر وأعد العضو إلى تجويف البطن عن طريق تمديد موقع الشق برفق باستخدام ملقط مغلق. الآن ، قم بخياطة طبقة العضلات ب 5-0 خيوط قابلة للامتصاص وضع 2 إلى 4 عقدة مستقلة. وبالمثل ، قم بخياطة طبقة الجلد ب 5-0 أو 6-0 خيوط نايلون غير قابلة للامتصاص وضع 2 إلى 4 عقدة مستقلة.