توليد نموذج سرطان الخلايا الكلوية: بروتوكول لتطوير نموذج الفئران RCC تقويمي عن طريق زرع الخلايا السرطانية داخل الكلى

يؤدي زرع خلايا سرطان الخلايا الكلوية ، أو RCC ، من فأر متبرع إلى كلية فأر متلقي يعاني من نقص المناعة إلى تطوير نموذج RCC تقويم العظام.

لتطوير نموذج RCC تقويم العظام ، ابدأ بوضع فأر مخدر يعاني من نقص المناعة في وضع الانبطاح على لوحة التشريح. الآن ، استخدم مشرطا لعمل قطع جراحي على الجانب الأيسر من الفأر ، مع الحفاظ على الصفاق الأساسي سليما.

جس الماوس عن طريق الضغط اللطيف من الأسفل. تساعد هذه الخطوة في تصور الكلى من خلال الصفاق الشفاف. بعد ذلك ، خذ حقنة تحتوي على تعليق خلية RCC في وسط مناسب. باستخدام إبرة ، قم بحقن معلق الخلية في الكلى دون الإضرار بالصفاق.

اسحب الإبرة وأغلق موقع الشق باستخدام مادة لاصقة للأنسجة. اسمح للفأر بالتعافي ومراقبة نمو الورم على فترات زمنية مطلوبة. في البداية ، يتم زرع خلايا سرطان الكلى المحقونة في الكلى. ثم تتكاثر هذه الخلايا لتشكل أورام.

بعد ذلك ، قد تنفصل بعض الخلايا عن الورم الأولي وتنتشر داخل التجويف البريتوني. يمكن لهذه الخلايا السرطانية المهاجرة أن تغزو أنسجة الرئة وتنتقل لتكوين أورام ثانوية.

لتحضير خلايا ورم Renca ، أولا ، قم بإرفاق مزرعة الخلية بنسبة 0.25٪ تربسين في HBSS بعد الشطف باستخدام PBS. قم بتحييد التفاعل بعد 5 دقائق باستخدام وسيط RPMI كامل. نقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي الشكل للطرد المركزي وإعادة تعليق الحبيبات في HBSS الطازجة.

بعد العد ، اضبط الحجم على 2 في 10 إلى الخلايا السادسة لكل تركيز مليلتر في HBSS ، واسحب الخلايا إلى حقنة سعة 1 مليلتر مزودة بإبرة قياس 18. بعد ذلك ، ضع ستارة جراحية معقمة فوق وسادة تدفئة وتأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم. قم بإزالة الشعر من الجانب الأيسر للفأر ووضع مرهم بيطري على العينين.

بعد ذلك ، قم بمسح موقع الزرع بمطهر بوفيدون اليود بنسبة 5٪ ، واستخدم مشرطا معقما لعمل شق واحد من 1 إلى 1.5 سم على الجانب الأيسر ، مع الحرص على عدم اختراق الصفاق. باستخدام المقص ، افصل الأدمة عن الصفاق ، وقم بتربيت موقع الشق بشاش قطني معقم لإزالة أي دم. بعد ذلك ، أمسك الرأس باليد اليسرى وادعم الجناح باليد اليمنى لتحديد موقع الطحال من خلال الصفاق.

باستخدام إصبع واحد من اليد اليمنى ، المس الماوس من الأسفل. يجب أن تصبح الكلى مرئية. الحفاظ على قبضة قوية على لتوفير التوتر عبر الصفاق والكلى ، اطلب من مساعد توصيل 0.1 مل من خلايا Renca ببطء من خلال الصفاق السليم إلى مركز الكلى. أمسك الإبرة في مكانها لمدة 5 إلى 10 ثوان لتقليل التدفق العكسي للخلايا. ثم أغلق الشق بطبقة رقيقة من مادة لاصقة من أنسجة سيانواكريلات.