تحليل تعبير البروتين القائم على مصفوفات البروتين في المرحلة العكسية: إجراء للقياس الكمي المتزامن للتعبير عن بروتينات متعددة من محللة الخلية

تحتوي عينة الورم على مجموعة غير متجانسة من البروتينات. باستخدام محللة الورم ، يمكن تحليل العديد من هذه البروتينات بالتوازي لتحديد البروتين محل الاهتمام. تسمى هذه التقنية عالية الإنتاجية مصفوفات البروتين ذات الطور العكسي أو RPPA.

لإجراء RPPA ، ابدأ بأخذ شريحة زجاجية من المقايسة المناعية المغلفة بالنيتروسليلوز. اكتشف مجموعة من بروتينات تحلل الورم على الشريحة. احتضان للسماح بالتقاط البروتين على النيتروسليلوز. بعد ذلك ، عالج الشريحة بمخزن مؤقت مانع يمنع مواقع ربط الأجسام المضادة غير المحددة على البروتينات.

قم بإزالة محلول الحجب الزائد. الآن ، قم بتركيب الشريحة المطلية بالبروتين في حامل وأغلقها بإحكام. هذا يخلق آبارا مؤقتة فوق سطح الشريحة. بعد ذلك ، قم بتحميل الآبار بمحلول الجسم المضاد الأساسي. تتعرف هذه الأجسام المضادة على الحلقات الموجودة في الهدف المقابل من خليط من البروتينات الموجودة على المصفوفة.

أخيرا ، أضف الأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات الفلورية. ترتبط هذه الأجسام المضادة بالأجسام المضادة الأولية المرتبطة مسبقا والتي تشكل مركبا. اغسل الشريحة لإزالة أي أجسام مضادة ثانوية غير مرتبطة. قم بفك الشريحة من الحامل واتركها تجف في الهواء.

امسح الشريحة ضوئيا باستخدام ماسح ضوئي للفلورسنت. تتألق البروتينات المستهدفة الموسومة بالأجسام المضادة بطول موجي معين وتظهر على شكل بقع ملونة على س