موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:57 دقيقة • April 30th, 2023
الزرد البالغ على كلية واحدة مسطحة متصلة بجدار الجسم الظهري من خلال الأنسجة الضامة. يتكون من ثلاث مناطق رئيسية: الرأس والجذع والذيل. الوحدة الوظيفية للكلى ، النيفرون ، متفرعة للغاية وتستنزف إلى قناتين رئيسيتين للجمع.
لعزل الكلى ، أولا ، قم بإعداد سمكة الزرد البالغة القتل الرحيم بحيث يكون جانبها البطني متجها لأعلى. قم بعمل شق خلف الطبقة - رفرف عظمي يغطي الخياشيم - لإزالة الرأس. بعد ذلك ، قم بعمل شق آخر من الرأس إلى قاعدة الزعنفة الذيلية أو الزعنفة الذيلية لكشف الأعضاء الداخلية وإزالتها.
الآن ، افتح جدران الجسم لتصور الكلى. تشريح النسيج الضام الأساسي لفصل الكلية عن الجدار الظهري. انقل العضو إلى قارورة تحتوي على مخزن مؤقت مناسب ، واغسله جيدا لإزالة الحطام. يساعد المخزن المؤقت على توفير الظروف الفسيولوجية. بعد الغسيل ، ضع الكلية ، رطبة بمحلول ، على شريحة زجاجية.
تأكد من أن الكلية مسطحة تماما ، مع عمل جروح في النسيج الضام إذا لزم الأمر. تساعد هذه الخطوة في سهولة التصور أثناء التصوير. أخيرا ، قم بتأمين مستحضر العضو باستخدام غطاء مثبت بقطع طينية نموذجية في زواياها. يساعد الطين على منع تشوه الأنسجة. الأنسجة المسطحة جاهزة الآن للتحليل المجهري.
للبدء ، قم بصب أي محلول إضافي من سمكة مخدرة وضعها على منديل أو منشفة ورقية. بعد إزالة الرأس والأعضاء الداخلية ، استخدم إبر تشريح فائقة النعومة لفتح جدران الجسم. حدد موقع عضو الكلى الملتصق بالجدار الظهري للحيوان.
استخدم ملقطا دقيقا لفصل الكلية عن الجدار الظهري. ضع الكلية برفق في قارورة زجاجية سعة 5 ملليلتر تحتوي على 1x PBS واغسلها ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منها. قم بإزالة الكلية باستخدام ماصة النقل وضعها على شريحة زجاجية نظيفة مع قطرة إلى قطرتين من 1x PBS.
استخدم ملقطا دقيقا لتسطيح الكلى على الشريحة ، مع التأكد من عدم تجعد أي نسيج أو انقلبت على نفسها. يمكن استخدام أداة سلك التنغستن لعمل شقوق صغيرة في النسيج الضام لتسهيل وضع الكلى بشكل مسطح.
بعد ذلك ، ضع قطعا صغيرة من طين النمذجة على كل ركن من أركان غطاء زجاجي مقاس 18 × 18 ملم. ضع الغطاء ببطء على الكلى ، مع الحفاظ على زاوية طفيفة لتقليل فقاعات الهواء المحبوسة. أضف قطرة إضافية قدرها 1x PBS لملء الفراغ بين الغطاء والشريحة إذا لزم الأمر.