أمراض التمدد: طريقة للتصوير البصري عالي الدقة لعينات الأنسجة السريرية
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:14 دقيقة • April 30th, 2023
علم أمراض التمدد ، أو ExPath ، هو تقنية لإعداد العينات البيولوجية ، والتي تسمح للفحص المجهري الضوئي التقليدي بتصوير الهياكل على نطاق النانو عن طريق توسيعها باستخدام نظام بوليمر.
أولا ، خذ شريحة عينة من الأنسجة الملطخة بالمناعة المعالجة وقم بتغطيتها بمحلول تثبيت يحتوي على كل من مجموعات البروتين والبوليمر. ترتبط المجموعة التفاعلية للبروتين في كاشف التثبيت بأمينات الجزيئات الحيوية داخل الخلايا.
بعد ذلك ، أضف محلول تبلور مناسب فوق العينة واحتضانه للسماح بانتشاره داخل الأنسجة. ترتبط المجموعة التفاعلية بالبوليمر من كاشف التثبيت بالمونومرات الحرة داخل محلول التبلور ، مما يسمح للجزيئات الحيوية بالتثبيت على البوليمر أثناء بلمرته.
بمجرد اكتمال بلمرة العينة ، قم بتغطية الشريحة بمحلول البروتيناز. تهضم البروتينات بروتينات الهيكل الخلوي لإزالة أي مقاومة هيكلية ، مما يسمح للخلايا بالتمدد دون تمزق. عند الهضم الأنزيمي ، تنفصل العينة المتبلور عن الشريحة وتنتقل إلى التعليق.
الآن ، انقل العينة إلى مخزن غسيل مناسب في حاوية متوافقة مع المجهر. بعد ذلك ، استبدل المخزن المؤقت بالماء واحتضانه. يمتص البوليمر كمية هائلة من الماء بالنسبة لكتلته ويتضخم.
مع توسع البوليمر ، تتحرك الجزيئات الحيوية المثبتة في شبكة البوليمر مع الاحتفاظ بتوجهها المكاني. هذا يسمح بسهولة تصورها تحت مجهر ضوئي تقليدي.
تحضير محلول التثبيت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية