أمراض التمدد: طريقة للتصوير البصري عالي الدقة لعينات الأنسجة السريرية

0 views • 4:14 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

علم أمراض التمدد ، أو ExPath ، هو تقنية لإعداد العينات البيولوجية ، والتي تسمح للفحص المجهري الضوئي التقليدي بتصوير الهياكل على نطاق النانو عن طريق توسيعها باستخدام نظام بوليمر.

أولا ، خذ شريحة عينة من الأنسجة الملطخة بالمناعة المعالجة وقم بتغطيتها بمحلول تثبيت يحتوي على كل من مجموعات البروتين والبوليمر. ترتبط المجموعة التفاعلية للبروتين في كاشف التثبيت بأمينات الجزيئات الحيوية داخل الخلايا.

بعد ذلك ، أضف محلول تبلور مناسب فوق العينة واحتضانه للسماح بانتشاره داخل الأنسجة. ترتبط المجموعة التفاعلية بالبوليمر من كاشف التثبيت بالمونومرات الحرة داخل محلول التبلور ، مما يسمح للجزيئات الحيوية بالتثبيت على البوليمر أثناء بلمرته.

بمجرد اكتمال بلمرة العينة ، قم بتغطية الشريحة بمحلول البروتيناز. تهضم البروتينات بروتينات الهيكل الخلوي لإزالة أي مقاومة هيكلية ، مما يسمح للخلايا بالتمدد دون تمزق. عند الهضم الأنزيمي ، تنفصل العينة المتبلور عن الشريحة وتنتقل إلى التعليق.

الآن ، انقل العينة إلى مخزن غسيل مناسب في حاوية متوافقة مع المجهر. بعد ذلك ، استبدل المخزن المؤقت بالماء واحتضانه. يمتص البوليمر كمية هائلة من الماء بالنسبة لكتلته ويتضخم.

مع توسع البوليمر ، تتحرك الجزيئات الحيوية المثبتة في شبكة البوليمر مع الاحتفاظ بتوجهها المكاني. هذا يسمح بسهولة تصورها تحت مجهر ضوئي تقليدي.

تحضير محلول التثبيت حسب تعليمات المخطوطة. ضع الشرائح في طبق بتري مقاس 100 ملم. ماصة محلول التثبيت على الأنسجة واحتضانها لمدة 3 ساعات على الأقل في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإعداد محلول التبلور وفقا لتوجيهات المخطوطة.

قم بإزالة محلول التثبيت الزائد من قسم الأنسجة وضع الشريحة مرة أخرى في طبق بتري. أضف محلول التبلور البارد الطازج إلى العينة واحتضن الخليط لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية. لبناء غرفة على الشريحة حول العينة ، قم بإنشاء فواصل عن طريق قطع قطع رقيقة من زجاج الغطاء بسكين ماسي. قم بتأمين الفواصل على جانبي الأنسجة بالماء وضع غطاء زجاجي بعناية فوق الشريحة ، مع التأكد من تجنب حبس فقاعات الهواء فوق الأنسجة.

ثم احتضان العينة عند 37 درجة مئوية في بيئة رطبة لمدة ساعتين. قم بإزالة غطاء حجرة التبلور عن طريق تحريك شفرة الحلاقة برفق أسفل الغطاء ورفعها ببطء عن سطح الجل. قم بقص الجل الفارغ حول الأنسجة لتقليل الحجم ، مع التأكد من قص الجل بشكل غير متماثل لتتبع الاتجاه.

قم بتخفيف البروتيناز K 1: 200 في المخزن المؤقت للهضم ، مع التأكد من تحضير محلول كاف لغمر الجل تماما. ثم احتضان العينة بالمحلول في وعاء مغلق لمدة 3 ساعات عند 60 درجة مئوية. إذا لم تنفصل العينة أثناء الهضم ، فاستخدم شفرة حلاقة لإزالتها برفق.

استخدم فرشاة رسم ناعمة لنقل العينة إلى 1X PBS في حاوية متوافقة مع نظام التصوير المطلوب وكبيرة بما يكفي لاستيعاب الجل الموسع بالكامل. اغسل العينة في PBS لمدة 10 دقائق ، وإذا رغبت في ذلك ، أعد تلبيتها ب 300 ملليمولار DAPI. قم بتوسيع العينات عن طريق غسل العينة بحجم زائد من الماء المقطر المزدوج من 3 إلى 5 مرات لمدة 10 دقائق لكل غسلة. ثم قم بإجراء التصوير الفلوري.

17:08

في الجسم الحي تتبع نسيلي من الخلايا الجذعية المكونة للدم والسلف تميزت خمسة البروتينات الفلورية باستخدام الميكروسكوب متحد البؤر وMultiphoton

Related Videos

0 Views

07:26

جزيء واحدة سوبر قرار تصوير فوسفتيدلينوستول 4،5-bisphosphate في غشاء البلازما مع رواية المسابر نيون

Related Videos

0 Views

06:18

تصوير البروتينات بودوسيتيك نيفرين، أكتين، وبودوسين مع المجهر التوسع

Related Videos

0 Views

13:49

ذات دقة عالية الألياف الضوئية للMicroendoscopy في الموقع الخلوية التصوير

Related Videos

0 Views

14:21

التصوير الضوئي المجال تواتر خارج الجسم عينات استئصال الرئة: الحصول على صورة واحدة واحدة لارتباط لالتشريح المرضي

Related Videos

0 Views

11:45

جيل والكميات 3-الأبعاد من الآفات الشرياني في الفئران عن طريق الإسقاط الضوئي المقطعي

Related Videos

0 Views

10:07

حل غاية intravital المجهري مخطط في الإضاءة مراكز جرمينال

Related Videos

0 Views

09:11

التصوير النانوسكوبي لأقسام الأنسجة البشرية عن طريق التوسع البدني والنظائري

Related Videos

0 Views

06:47

توسيع فهم البيئة الدقيقة للورم باستخدام تصوير قياس الطيف الكتلي لعينات الأنسجة الثابتة بالفورمالين والبارافين المضمنة

Related Videos

0 Views

10:31

احتباس جزيئي عالمي مع مجهر تمدد 11 ضعفا

Related Videos

0 Views

Last updated: 1 August 2026