JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 4:14 د • April 30th, 2023
علم أمراض التمدد ، أو ExPath ، هو تقنية لإعداد العينات البيولوجية ، والتي تسمح للفحص المجهري الضوئي التقليدي بتصوير الهياكل على نطاق النانو عن طريق توسيعها باستخدام نظام بوليمر.
أولا ، خذ شريحة عينة من الأنسجة الملطخة بالمناعة المعالجة وقم بتغطيتها بمحلول تثبيت يحتوي على كل من مجموعات البروتين والبوليمر. ترتبط المجموعة التفاعلية للبروتين في كاشف التثبيت بأمينات الجزيئات الحيوية داخل الخلايا.
بعد ذلك ، أضف محلول تبلور مناسب فوق العينة واحتضانه للسماح بانتشاره داخل الأنسجة. ترتبط المجموعة التفاعلية بالبوليمر من كاشف التثبيت بالمونومرات الحرة داخل محلول التبلور ، مما يسمح للجزيئات الحيوية بالتثبيت على البوليمر أثناء بلمرته.
بمجرد اكتمال بلمرة العينة ، قم بتغطية الشريحة بمحلول البروتيناز. تهضم البروتينات بروتينات الهيكل الخلوي لإزالة أي مقاومة هيكلية ، مما يسمح للخلايا بالتمدد دون تمزق. عند الهضم الأنزيمي ، تنفصل العينة المتبلور عن الشريحة وتنتقل إلى التعليق.
الآن ، انقل العينة إلى مخزن غسيل مناسب في حاوية متوافقة مع المجهر. بعد ذلك ، استبدل المخزن المؤقت بالماء واحتضانه. يمتص البوليمر كمية هائلة من الماء بالنسبة لكتلته ويتضخم.
مع توسع البوليمر ، تتحرك الجزيئات الحيوية المثبتة في شبكة البوليمر مع الاحتفاظ بتوجهها المكاني. هذا يسمح بسهولة تصورها تحت مجهر ضوئي تقليدي.
تحضير محلول التثبيت حسب تعليمات المخطوطة. ضع الشرائح في طبق بتري مقاس 100 ملم. ماصة محلول التثبيت على الأنسجة واحتضانها لمدة 3 ساعات على الأقل في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإعداد محلول التبلور وفقا لتوجيهات المخطوطة.
قم بإزالة محلول التثبيت الزائد من قسم الأنسجة وضع الشريحة مرة أخرى في طبق بتري. أضف محلول التبلور البارد الطازج إلى العينة واحتضن الخليط لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية. لبناء غرفة على الشريحة حول العينة ، قم بإنشاء فواصل عن طريق قطع قطع رقيقة من زجاج الغطاء بسكين ماسي. قم بتأمين الفواصل على جانبي الأنسجة بالماء وضع غطاء زجاجي بعناية فوق الشريحة ، مع التأكد من تجنب حبس فقاعات الهواء فوق الأنسجة.
ثم احتضان العينة عند 37 درجة مئوية في بيئة رطبة لمدة ساعتين. قم بإزالة غطاء حجرة التبلور عن طريق تحريك شفرة الحلاقة برفق أسفل الغطاء ورفعها ببطء عن سطح الجل. قم بقص الجل الفارغ حول الأنسجة لتقليل الحجم ، مع التأكد من قص الجل بشكل غير متماثل لتتبع الاتجاه.
قم بتخفيف البروتيناز K 1: 200 في المخزن المؤقت للهضم ، مع التأكد من تحضير محلول كاف لغمر الجل تماما. ثم احتضان العينة بالمحلول في وعاء مغلق لمدة 3 ساعات عند 60 درجة مئوية. إذا لم تنفصل العينة أثناء الهضم ، فاستخدم شفرة حلاقة لإزالتها برفق.
استخدم فرشاة رسم ناعمة لنقل العينة إلى 1X PBS في حاوية متوافقة مع نظام التصوير المطلوب وكبيرة بما يكفي لاستيعاب الجل الموسع بالكامل. اغسل العينة في PBS لمدة 10 دقائق ، وإذا رغبت في ذلك ، أعد تلبيتها ب 300 ملليمولار DAPI. قم بتوسيع العينات عن طريق غسل العينة بحجم زائد من الماء المقطر المزدوج من 3 إلى 5 مرات لمدة 10 دقائق لكل غسلة. ثم قم بإجراء التصوير الفلوري.
تعد باثولوجيا التمدد (ExPath) تقنية لتحضير العينات تتيح للمجهر الضوئي التقليدي تصور البنى ذات المقياس النانوي في العينات البيولوجية. تتضمن هذه الطريقة تمديد عينات الأنسجة باستخدام نظام بوليمري، مما يسمح بتعزيز قدرات التصوير.
تتيح باثولوجيا التمدد (Expansion pathology) تصوير البنى النسيجية نانوية المقياس بدقة عالية باستخدام المجهر الضوئي التقليدي، مما يقلل الاعتماد على المعدات المتخصصة في سير عمل الاكتشافات المبكرة. ويدعم هذا النهج التحقق من الأهداف من خلال الحفاظ على التوجه المكاني للجزيئات الحيوية مع تعزيز رؤية التفاصيل تحت الخلوية. كما أنه يعزز الثقة التنبؤية في النماذج قبل السريرية من خلال توفير تصوير كمي وقابل للتكرار لعينات الأنسجة السريرية.
تندرج علم أمراض التمدد (Expansion pathology) ضمن تسلسل الاكتشافات، بدءاً من الاختبار المبكر لفرضيات الأهداف وصولاً إلى التحقق من الصلاحية قبل السريرية، خاصة عندما تكون الدقة النانومترية مطلوبة لفهم الآليات الجزيئية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 22 أغسطس 2026