الفحص القائم على التلألؤ البيولوجي الخلوي: طريقة إنتاجية عالية لفحص الأدوية التوافقية

التلألؤ البيولوجي الخلوي هو نهج شديد الحساسية وسريع للفحص على نطاق واسع للأدوية المضادة للسرطان.

تستخدم هذه التقنية الخلايا السرطانية التي تعبر عن لوسيفيراز - وهو إنزيم يحفز تفاعلا كيميائيا منتجا للضوء ، مما يتسبب في توهج الخلايا المضيفة في الظلام. تتناسب شدة التلألؤ المنبعث طرديا مع كثافة الخلايا الحية.

للبدء ، البذور الخلايا التي تعبر عن اللوسيفيراز في صفيحة ثقافة واضحة بصريا مغطاة بمصفوفة خارج الخلية أو ECM وتحتضنها.

أثناء الحضانة ، يعزز ECM ارتباط الخلايا بالثقافة جيدا.

بعد ذلك ، خذ مخزونا مركزا من تركيبة الدواء وأضف كميات مختلفة من وسائط الثقافة لتحضير التخفيف التسلسلي لخليط الدواء.

الآن ، قم بإزالة وسط الثقافة من الخلايا الملتصقة. أضف تخفيفات مختلفة من تركيبة الدواء واحتضنها.

أثناء الحضانة ، تعمل تركيبة الدواء بشكل تآزري على الأهداف الخلوية.

الآن ، قم بإزالة الوسط المحتوي على الدواء وأضف وسيطا جديدا يحتوي على لوسيفيرين.

ينتشر لوسيفيرين عبر الغشاء ويدخل الخلايا. تستخدم اللوسيفيرازات التي تعبر عنها الخلايا ATP الخلوي لأكسدة اللوسيفيرين وإصدار إشارات ضوئية.

تحديد التلألؤ البيولوجي الخلوي تحت نظام التصوير.

يشير

انخفاض انبعاث الضوء مع زيادة تركيز الدواء إلى انخفاض قابلية الخلية للبقاء. يرتبط هذا بالتأثير المضاد للتكاثر للدواء على الخلايا المستهدفة.

قم بتغطية الألواح السفلية البصرية المكونة من 96 بئر بخليط مصفوفة خارج الخلية مثل Matrigel واحتضانها لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. قم بإزالة الخليط الزائد واشطف الأطباق برفق مرة واحدة باستخدام PBS.

بعد ذلك ، قم بزرع خلايا XG387-Luc بكثافة 1,000 خلية في 100 ميكرولتر من وسط الزراعة في كل بئر من الألواح المطلية وزرعتها بين عشية وضحاها. في اليوم التالي ، راقب الخلايا تحت المجهر لتأكيد ارتباطها باللوحة.

بعد ذلك ، قم بإعداد محلول تيموزولوميد 200 ميكرومولار ومحاليل 2 ميكرومولار للعوامل المستهدفة في وسط الاستزراع. لفحص الأدوية المركبة ، قم بإزالة الوسط الفارغ وأضف الوسط الذي يحتوي إما على 200 ميكرومولار تيموزولوميد أو عامل مستهدف 2 ميكرومولار ، أو مزيج من الاثنين معا ، في كل بئر لمدة 3 تكرارات تقنية لكل معالجة.

احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 3 أيام. التقط صورا للتلألؤ البيولوجي الخلوي في اللوحة باستخدام نظام التصوير الطيفي IVIS. باستخدام البرنامج المدمج ، قم بإنشاء مناطق دائرية متعددة في المنطقة ذات الاهتمام وحدد التلألؤ البيولوجي الخلوي.