JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 2:37 د • April 30th, 2023
للحفاظ على عينة دماغ الفئران بالتبريد عن طريق التجميد المفاجئ ، ابدأ بأخذ دورق مملوء بمحلول الأيزوبنتان - وهو سائل عالي التوصيل - واغمره في وعاء يحتوي على النيتروجين السائل.
قم بتجميد الأيزوبنتان حتى يصبح المحلول لزجا.
في هذه الأثناء ، خذ عينة كاملة من دماغ الفأر مسبوقة بمحلول السكروز. يمنع هذا العلاج تشوه أنسجة المخ في الخطوات اللاحقة.
قم بإزالة عينة الدماغ من محلول السكروز وامسحها حتى تجف لإزالة أي آثار للسكروز.
بعد ذلك ، ضع الدماغ في الاتجاه المطلوب في تبريد عميق يحتوي على طبقة من وسط التضمين.
قم بتراكب الدماغ في cryomold بمزيد من وسائط التضمين لضمان تغطية العضو بالكامل.
بعد ذلك ، اغمر التبريد الذي يحتوي على الدماغ المدمج في حمام الأيزوبنتان المبرد مسبقا. يضمن التبريد السريع لأنسجة المخ إلى درجة حرارة منخفضة للغاية الاحتفاظ ببنية الدماغ دون أي تشويه.
الآن ، اسمح لعينة الدماغ بالتجميد حتى يتجمد وسط التضمين لتشكيل طبقة هلامية حول الدماغ ، وتثبيتها في مكانها.
بمجرد التجميد ، قم بإزالة cryomold من حمام الأيزوبنتان ولف دماغ الفأر المحفوظ بالتبريد في ورقة من رقائق الألومنيوم.
قم بتخزين العينة عند ثمانين درجة مئوية تحت الصفر لمزيد من التحليل النسيجي.
للتحضير للحفظ بالتبريد ، املأ برطمانا بالأيزوبنتان البارد / 2-ميثيل بوتان وضع البرطمان في وعاء مملوء بالنيتروجين السائل. أثناء تقشعر لها الأبدان ، جفف الدماغ على قطعة من ورق الترشيح وضع الدماغ في قالب تبريد مسمى.
أضف بعناية ما يقرب من 5 ملليلتر من وسط القطع الأمثل لدرجة الحرارة إلى مركز التبريد وضع الدماغ في القالب في الاتجاه المطلوب. باستخدام ملقط نظيف ، ضع المبرد بسرعة في الأيزوبنتان / 2-ميثيل البيوتان المبرد لمدة 30 إلى 40 ثانية.
بمجرد أن يصلب وسط القطع ، انقل المبردة إلى الثلج الجاف ولف أنسجة الدماغ المجمدة بالتبريد في ورق الألمنيوم للتخزين 80 درجة مئوية تحت الصفر.