موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:41 دقيقة • April 30th, 2023
للتمييز بين مجموعات خلايا معينة في أنسجة ورم دماغي الفأر غير المتجانسة لعزلها اللاحق ، ابدأ بأخذ شريحة زجاجية تحمل قسم أنسجة ورم الدماغ المحفوظ بالتبريد محل الاهتمام.
احتضان الأنسجة بالتتابع في تناقص تركيزات الإيثانول. يذيب الإيثانول وسط التضمين الذي اخترق الأنسجة ويثبت الأنسجة مع الحفاظ على سلامة الحمض النووي.
بالإضافة إلى ذلك ، يعيد الإيثانول ترطيب الأنسجة ، مما يتيح تلطيخا متساويا خلال الخطوات اللاحقة.
الآن ، عالج الأنسجة بالبنفسج Cresyl. كريسيل البنفسجي - صبغة أساسية - يلطخ المكونات الخلوية الحمضية مثل الأحماض النووية.
بعد ذلك ، قم بتلطيخ الأنسجة باستخدام Eosin Y. Eosin Y - صبغة حمضية - تلطخ المكونات الخلوية الأساسية مثل البروتينات السيتوبلازمية.
تساعد خطوة التلوين التفاضلية هذه على التمييز بين السيتوبلازم والهياكل الخلوية الأخرى ، مما يتيح تحديد الخلايا ذات الأهمية.
بعد التلوين ، اغمر الأنسجة في تركيزات متزايدة من الإيثانول لتجفيف الأنسجة وتجنب تشويه الأنسجة المفرط.
بعد ذلك ، اغسل الأنسجة بالزيلين. يزيح الزيلين ويزيل الإيثانول من قسم الأنسجة.
أخيرا ، أضف محلول تثبيت مناسب على قسم الأنسجة للحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة.
قسم الأنسجة المعالجة جاهز للاستخدام في التشريح الدقيق بالليزر - وهي عملية تسمح بالعزل الدقيق لخلايا معينة من الأنسجة.
اغمر الشرائح في غمر الإيثانول التنازلي المتسلسل لمدة 30 ثانية ، متبوعا بتلطيخ محلول بنفسجي بلوري لمدة 20 ثانية و 5 ثوان في محلول يوزين Y بنسبة 0.5٪.
في نهاية حضانة اليوزين Y ، استخدم ورق الترشيح لتجفيف الشرائح وتجفيف الشرائح في غمر الإيثانول الصاعد المتسلسل. بعد غمر الإيثانول لمدة 60 ثانية ، اشطف الشرائح في وعاء من الزيلين لمدة 3 دقائق.
بعد ذلك ، قم بتجفيف الشرائح على سطح خال من RNase في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 ثوان قبل تركيب العينات في وسط تركيب محضر بماء خال من RNase. بعد 10 إلى 20 ثانية ، انقل الشرائح إلى منصة التشريح المجهري.