موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:00 دقيقة • April 30th, 2023
يتميز انتشار البروتينات في كل مكان بإضافة اليوبيكويتين - وهو بروتين صغير تنظيمي - عبر بقايا ثنائي جلايسين إلى بقايا اللايسين لبروتين الركيزة. هذا يولد رابطا بين اللايسين والجلايسين والجلايسين بين بروتين الركيزة واليوبيكويتين.
لعزل الببتيدات الموسومة باليوبيكويتين ، ابدأ بتناول مزيج الببتيد.
عالج هذه الببتيدات بكوكتيل إنزيم نوكلياز داخلي. أثناء العلاج ، تشق الإنزيمات Lys-C و trypsin بكفاءة الببتيدات الموجودة في كل مكان في بقايا الأرجينين ، مما ينتج عنه شظايا الببتيد التي تحتوي على شكل ثنائي جلايسين مميز.
أضف شظايا الببتيد هذه إلى ملاط من حبات الهيدروجيل المترافقة بالأجسام المضادة.
تحتوي هذه الأجسام المضادة على موقع التعرف على ثنائي جلايسين ، والذي يرتبط حصريا بالببتيدات الموجودة في كل مكان ، ويشكل مركب حبة الببتيد.
جهاز طرد مركزي لتكوير مجمعات حبة الببتيد في كل مكان. قم بإزالة المادة الطافية غير المنضمة المحتوية على الببتيد في كل مكان.
قم بتحميل المجمعات على مجموعة مرشح. جهاز طرد مركزي لإزالة المخزن المؤقت واحتجاز الخرز المترافق بالببتيد.
أضف كاشفا محمضا يخفض درجة الحموضة ، مما يتسبب في فك ارتباط الببتيدات من الخرز.
استرجع الببتيدات الحرة من المرشح. قم بتحميلها على مرشح جديد بمصفوفة كارهة للماء. تحتفظ الببتيدات في المصفوفة بينما يتم غسل الأملاح الحمضية.
باستخدام مذيب مناسب ، افصل ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية