العزل القائم على SEC للحويصلات خارج الخلية المشتقة من الخلايا الدبقية الصغيرة: تقنية لعزل الحويصلات خارج الخلية من وسائط الثقافة المكيفة للخلايا الدبقية الصغيرة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:37 دقيقة • April 30th, 2023
تطلق الخلايا الدبقية الصغيرة وسطاء مناعيين على شكل حويصلات خارج الخلية أو EVs ، بما في ذلك أجسام موت الخلايا المبرمج الأكبر حجما والحويصلات الصغيرة الحجم ، في وسط النمو في المختبر.
لعزل المركبات الكهربائية ، ابدأ بأخذ وسائط مكيفة للخلايا الدبقية الصغيرة. تحتوي وسائط الثقافة هذه على خلايا دبقية صغيرة جنبا إلى جنب مع المركبات الكهربائية التي تم إصدارها. الطرد المركزي الوسائط لحبيبات الخلايا.
اجمع المادة الطافية التي تحتوي على المركبات الكهربائية والحطام ومجاميع البروتين في أنبوب جديد. جهاز الطرد المركزي مرة أخرى لإزالة الحطام الخلوي والأجسام المتبرمجة الكبيرة.
انقل المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي فائق. جهاز طرد مركزي بسرعة عالية.
تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على وسائط مستهلكة وأعد تعليق حبيبات المركبات الكهربائية والبروتين في المخزن المؤقت المطلوب.
فيالوقت نفسه ، خذ عمودا كروماتوغرافيا لاستبعاد الحجم مع مرشح مناسب في قاعدته.
قم بتعبئة العمود بإحكام بمصفوفة ترشيح هلامية تتكون من حبات هلامية كروية تشكل منخل مسامي بحجم مسام محدد.
قم بتحميل تعليق EV والبروتين الإجمالي أعلى المرحلة الثابتة.
عندما يمر التعليق عبر العمود ، تتحرك المركبات الكهربائية الأكبر حجما عبر المساحات بين الجسيمات بين حبات الهلام ، وتسير في مسار أقصر. في المقابل ، تنتقل مجاميع البروتين الأصغر حجما إلى المسام ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية