مقايسة جذب البلاعم العابرة القائمة على التألق: طريقة في المختبر لدراسة تفاعل الورم والبلاعم من خلال الانجذاب الكيميائي الناجم عن المواد الكيميائية

استجابة لبعض الجاذبات الكيميائية التي تطلقها الأورام الصلبة ، تتسلل الخلايا المناعية مثل الضامة المرتبطة بالورم أو TAMs إلى الأورام الصلبة. بعد ذلك ، تسهل هذه TAMs تطور الورم.

لدراسة التفاعلات بين TAMs والخلايا السرطانية في المختبر ، ابدأ بأخذ صفيحة متعددة الآبار مع ملحق غشائي. يفصل هذا الترتيب البئر مؤقتا إلى جزئين.

بعد ذلك ، أضف تعليقا من TAM إلى المقصورة العلوية من البئر.

استكمل الجزء السفلي من الترانسويل بوسط مكيف غني بجاذبات كيميائية تفرزها الخلايا السرطانية.

احتضان اللوحة للوقت المطلوب.

أثناء الحضانة ، تجذب المعدلات الكيميائية TAMs. هذا يؤدي إلى حركة TAMs إلى المقصورة السفلية عبر غشاء الإدخال المسامي من خلال الانجذاب الكيميائي الناجم عن المواد الكيميائية.

الآن ، قم بإزالة الملحق من البئر. نقل الوسط المكيف الذي يحتوي على سكان TAM المهاجرين إلى لوحة مناسبة لقياس الفلورسنت.

عالج الخلايا بمحلول تحلل يحتوي على صبغة الفلورسنت. يعمل هذا المخزن المؤقت على تحلل البلاعم. في النهاية ، ترتبط جزيئات الصبغة بالأحماض النووية ، مما ينتج عنه تألق محسن.

أخيرا ، امسح اللوحة باستخدام قارئ لوحة الفلورة. يشير التألق العالي إلى الهجرة الناجحة للبلاعم من خلال الانجذاب الكيميائي الناجم عن المواد الكيميائية.

أولا ، أحضر المواد اللازمة إلى درجة حرارة الغرفة. أضف 250 ميكرولترا من خلايا MV-4-11 المحضرة إلى كل إدخال. بعد ذلك ، أضف 400 ميكرولتر من الوسط / الوسط المكيف فقط إلى الغرف السفلية للوحة المكونة من 24 بئرا ، مع التأكد من إضافة العينات في ثلاث نسخ.

احتضان عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 4 ساعات. بعد ذلك ، اضغط برفق على الملحق الموجود على الجدار الداخلي لنفس البئر وتخلص من الإدخال. قم بتقطيع الخلايا في الآبار برفق لأعلى ولأسفل ثلاث مرات للخلط.

انقل 225 ميكرولترا من معلق الخلية هذا إلى آبار صفيحة ذات جدران سوداء 96 بئرا مناسبة لقياس الفلورسنت. بعد ذلك ، قم بتخفيف صبغة CyQuant بمخزن مؤقت للتحلل 4x بنسبة 1:75. دوامة لفترة وجيزة وتدوير المحلول.

انقل 75 ميكرولترا من هذا المحلول إلى كل بئر من اللوحة المكونة من 96 بئرا واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. باستخدام قارئ لوحة مضان ، اقرأ التألق وحلل البيانات كما هو موضح في بروتوكول النص.