مقايسة تخليق الحمض النووي: تقنية لتقييم تخليق الحمض النووي في الخلايا المتكاثرة باستخدام دمج الثايميدين المثيل المشع

ابدأ بأخذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا ملتصقة.

عالج هذه الخلايا بوسائط تحتوي على الثايميدين المتريت - نسخة مشعة من الثايميدين - واحتضنها.

أثناء الحضانة ، تتضمن الخلايا المتكاثرة بنشاط الثايميدين المشع. أزواج هذا الثايميدين مقابل الأدينوزين ، مما ينتج عنه الحمض النووي المسمى بالإشعاع في الخلايا المتكاثرة.

قم بإزالة الوسائط المستهلكة من الآبار. أضف عازلة تحلل لتحلل الخلايا وإطلاق الحمض النووي في المعلق.

قم بإعداد مجموعة حصادة الخلايا عن طريق وضع أنابيب التجميع الخاصة بالحصادة فوق آبار الصفيحة الدقيقة.

قم بتطبيق ضغط الشفط لتمكين شفط الحمض النووي المعلق من الآبار. يترسب هذا الحمض النووي على ورق الترشيح ، ويشكل بقعا محددة.

قص قطع ورق الترشيح ببقع الحمض النووي. انقل هذه الشاد بشكل فردي إلى قوارير متلألئة.

تراكب ورق الترشيح بكوكتيل متلألئ. ضع القارورة في عداد تلألؤ سائل.

داخل المنضدة ، ينبعث الحمض النووي المسمى من الطاقة عن طريق التحلل الإشعاعي. يتم امتصاص هذه الطاقة بواسطة مكونات كوكتيل التلألؤ. في النهاية ، تبدأ مكونات الكوكتيل في نقل النبضات ، والتي بدورها يمتصها المستشعر.

تحدد كمية النشاط الإشعاعي المكتشفة مدى انقسام الخلايا.

لوحة 100,000 خلية في آبار ثلاثية في صفيحة 24 بئرا. بعد 46 ساعة ، أضف الثايميدين المثلث إلى وسط الثقافة واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين.

ثم ، بعد إزا