استخراج الحويصلة خارج الخلية: تقنية لعزل الحويصلات خارج الخلية من عينات الأنسجة الكاملة باستخدام الطرد المركزي التفاضلي
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:13 دقيقة • April 30th, 2023
في الأنسجة الكاملة ، تطلق الخلايا الحويصلات خارج الخلية أو المركبات الكهربائية في السائل الخلالي. وتشمل هذه الأجسام موت الخلايا المبرمج ، والحويصلات الدقيقة ، والإكسوسومات. تلعب المركبات الكهربائية دورا مهما في الحفاظ على الاتصال من خلية إلى خلية.
لاستخراج المركبات الكهربائية ، ابدأ بأخذ عينة كاملة من الأنسجة.
عالج الأنسجة بمحلول انفصال مناسب. تعمل مكونات المخزن المؤقت للتفكك على تفكيك المصفوفة خارج الخلية الموجودة في الأنسجة ، مما يؤدي في النهاية إلى فك الخلايا.
انقل المعلق إلى الخالط وقم بتعطيل الأنسجة ميكانيكيا لفصلها وتحرير الخلايا.
بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي المتجانس بسرعة منخفضة لتكوير الخلايا وشظايا الأنسجة بينما تظل المركبات الكهربائية في المادة الطافية.
خذ المادة الطافية في أنبوب جديد. جهاز طرد مركزي بسرعة عالية لتكوير معظم الأجسام المتبرمج الأكبر حجما ، مما يترك المركبات الكهربائية الأصغر حجما في المادة الطافية.
اجمع المادة الطافية المحتوية على EV في حقنة. قم بتصفية المكونات لإزالة أي أجسام موت الخلايا المبرمج المتبقية وجمع مجموعات المركبات الكهربائية الصغيرة الحجم.
جهاز الطرد المركزي للمرشح للحصول على المركبات الكهربائية في الحبيبات. تخلص من المخزن المؤقت المتبقي وأعد تعليق حبيبات EV في محلول السكروز. يخلق هذا الحل بيئة متساوية التوتر للمركبات الكهربائية للاحتفاظ بمورفو
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية