زراعة الخلايا البطانية من الأوعية الدقيقة لدماغ الفئران: إجراء لعزل وزراعة الخلايا البطانية من الأوعية الدقيقة لدماغ الفئران

لعزل الخلايا البطانية الدماغية ، أولا ، قم بنقل دماغ الفئران المحصود إلى طبق يحتوي على عازلة مبردة.

بعد إزالة المخيخ والأعصاب البصرية ، قسم الدماغ إلى نصفي الكرة المخية. ثم افصل الدماغ المتوسط عن الدماغ الأمامي.

قم بإزالة السحايا والمادة البيضاء المحتوية على المايلين من الدماغ الأمامي ، تاركا وراءها قشرة الدماغ لعزل الأوعية الدقيقة.

بعد ذلك ، قم بتجانس القشرة لكسر الأنسجة العصبية ومكوناتها.

الطرد المركزي المتجانس لإزالة الحطام الخلوي والمايلين.

بعد ذلك ، عالج حبيبات الأنسجة بكوكتيل هضم يحتوي على إنزيمات الكولاجيناز والتباين والديوكسيربونوكلياز.

تهضم الكولاجيناز والتباين المصفوفة خارج الخلية التي تدمج الأوعية الدقيقة ، مما يؤدي إلى تخفيف شظايا الأوعية الدقيقة من الأنسجة. تعمل منقوص الأكسجين بونوكليازات على تحلل أي حمض نووي حر يتم إطلاقه من الخلايا المحللة.

امزج الحجم المطلوب من المتجانس المهضوم مع وسط تدرج الكثافة المناسب وجهاز طرد مركزي.

تخلص من المايلين والطبقة العليا التي تحتوي على الخلايا المتني في الدماغ ، متبوعة بالطاف.

الآن ، عالج الحبيبات المحتوية على الأوعية الدقيقة بكوكتيل الهضم لتحرير شظايا الأوعية الدقيقة التي تتكون من الخلايا البطانية والخلايا الحضوجية تماما.

الطرد المركزي التعليق. أعد تعليق الحبيبات المحتوية على شظايا الوعاء الدقيق في وسط مناسب مكمل بالبورومايسين - مضا