عزل الحمض النووي الخالي من الخلايا المنتشرة (cfDNA): إجراء غشاء قائم على السيليكا لاستخراج cfDNA من بلازما الدم لمرضى السرطان

الحمض النووي الخالي من الخلايا المتداولة أو cfDNA عبارة عن أجزاء قصيرة من الحمض النووي تطلقها الخلايا السرطانية التي تخضع لموت الخلايا المبرمج. CFDNA هي مؤشرات حيوية واعدة للسرطان ويمكن عزلها عن سوائل الجسم مثل البلازما.

لعزل cfDNA ، أولا ، احصل على عينة بلازما من مريض سرطان. بعد ذلك ، عالج البلازما بمحلول تحلل يحتوي على البروتيناز K والأملاح الفوضوية والحمض النووي الريبي الناقل. تعمل الأملاح الفوضوية على تغيير طبيعة البروتينات ، وتطلق cfDNA المرتبطة من البروتينات. يعمل البروتيناز K على تعطيل النوكليازات ، وبالتالي تقليل تدهور cfDNA.

بعد ذلك ، أضف المخزن المؤقت الملزم المطلوب إلى العينة. قم بتجميع عمود دوران يحتوي على مصفوفة سيليكا ذات طور صلب على جهاز التفريغ. قم بتحميل العينة في العمود. ضع الفراغ لتمرير العينة عبر غشاء السيليكا.

يرتبط الحمض النووي الريبي الحامل بشكل غير محدد بجدران الأنبوب. يسهل هذا الارتباط غير المحدد جنبا إلى جنب مع وجود الأملاح في المخزن المؤقت ارتباط cfDNA بغشاء السيليكا ، مما يزيد من استعادة cfDNAs. لا تحتفظ البروتينات والملوثات الأخرى بالغشاء.

الآن ، ضع عمود الدوران على أنبوب تجميع. جهاز طرد مركزي لإزالة أي محللة متبقية. أضف عازلة غسيل مناسبة وجهاز طرد مركزي لإزالة الأملاح وأي ملوثات متبقية من العمود. أخيرا ، انقل العمود إلى أنبوب تجميع جديد وأضف عازلة شطف