JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 5:06 د • July 8th, 2025
يمكن هندسة الخلايا الجذعية الوسيطة أو الخلايا الجذعية الوسيطة وراثيا للتعبير عن الترابط المحفز لموت الخلايا المبرمج المرتبط بعامل نخر الورم أو TRAIL ، والذي يرتبط بمستقبلات محددة على الخلايا السرطانية التي تحفز موت الخلايا المبرمج.
لتسليم هذه الخلايا الجذعية الجذعية في نموذج فأر يحمل الورم ، أولا ، قم أولا بإعداد سقالة بوليمر حيوي ببذور MSC معبرة عن TRAIL. بعد ذلك ، قم بتأمين فأر مخدر يحمل ورما دماغيا مسمى بالفلورسنت على إطار تجسيمي. يحتوي الفأر على نافذة قحفية محددة مسبقا للوصول إلى الدماغ.
حافظ على درجة حرارة جسم الماوس باستخدام وسادة تدفئة. تعقيم موقع الجراحة وعمل شق خط الوسط في فروة الرأس. قم بإزالة الدهون تحت الجلد للكشف عن نافذة الجمجمة. انزع الأم الجافية من النافذة ، وكشف الأنسجة المتني الأساسي والورم.
الآن ، تحت المجهر المجسم الفلوري ، تصور الورم الفلوري. شفط أنسجة الورم الفلورية من الدماغ. يغسل بالمحلول الملحي لاستعادة درجة الحموضة الفسيولوجية. زرع السقالة الحاصلة على MSC في تجويف الاستئصال. ضع عامل مرقئ مناسب لتثبيت السقالة في مكانها. أغلق الشق واترك الماوس يتعافى.
بعد الزرع ، تفرز الخلايا السرطانية داخل بؤر الورم المتبقية عوامل قابلة للذوبان ، مما يسهل هجرة الخلايا الجذعية الجذعية من السقالة نحو الخلايا السرطانية. ترتبط بروتينات TRAIL التي تفرزها الخلايا الجذعية الجذعية بمستقبلات محددة على الخلايا السرطانية ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمجة.
ابدأ بوضع الإطار التجسيمي على مسرح المجهر المجسم التشريح الفلوري. بعد ذلك ، قم بتأمين الماوس المخدر على الإطار التجسيمي باستخدام إمداد التخدير المستنشق المستمر عبر محول مخروط الأنف الأيزوفلوران. حافظ على درجة حرارة الجسم باستخدام وسادة التدفئة. ضع مرهم العين على العينين لمنع جفاف القرنية. بعد ذلك ، قم بتعقيم موقع شق فروة الرأس بسلسلة من ثلاثة كحول وثلاث مناديل بيتادين.
قم بإجراء اختبار انعكاس قرصة إصبع القدم على كل طرف وتأكد من الاستجابة السلبية لضمان التخدير المناسب. باستخدام الملقط ، اقرص فروة الرأس وارفعها برفق. بعد إجراء شق ذيلية خطي في خط الوسط باستخدام مقص جراحي ، قم بري موقع الشق باستخدام PBS وإزالة الدهون تحت الجلد باستخدام قضيب طرف قطني بحركة تنظيف دائرية.
رتب الجلد بحيث تكون نافذة الجمجمة التي تم إنشاؤها مسبقا مرئية بالكامل. استخدم إبرة قياس 18 لثقب الجافية برفق داخل حدود نافذة الجمجمة. كرر حتى يتتبع الشق الجزء الداخلي من النافذة بالكامل. قم بإزالة الجافية عن طريق تقشيرها باستخدام ملقط دقيق ، للكشف عن الحمة والورم الكامن.
بعد ذلك ، قم بتعتيم أضواء الغرفة وقم بتشغيل وضع التألق المجهري المجسم. حدد موقع الورم المعبر عن لوسيفيراز U87 mCherry و Firefly. قم بتحميل طرف ماصة سعة 200 ميكرولتر في نهاية أنبوب مضخة التفريغ. ثم قم بتشغيل مضخة التفريغ. استئصال الورم عن طريق شفط الأنسجة الفلورية برفق حتى لا تبقى أي إشارة. للسيطرة على النزيف ، قم بالري باستخدام PBS البارد وقم بالضغط الثابت باستخدام قضيب طرف قطني.
استخدم مزيجا من المحلول الملحي والضغط الثابت مع قضيب طرف قطني و / أو عامل مرقئ ، مثل SURGICEL ، لوقف النزيف قبل زرع السقالة. إذا لم يتم التحكم فيه بشكل صحيح ، فقد يتشكل ورم دموي يحتمل أن يكون خطيرا. بعد الاستئصال، قم بإيقاف تشغيل مضخة التفريغ وتخلص من طرف الماصة. أطفئ التألق وتضيء الغرفة احتياطيا. قبل الزرع مباشرة ، قم بغمس سقالة PLA المصنفة ببطء في PBS لإزالة الوسائط غير المرغوب فيها والمكونات المرتبطة بها. زرع السقالة في تجويف الاستئصال.
إذا لزم الأمر ، أضف 1 ميكرولتر من الفيبرينوجين ، متبوعا ب 1 ميكرولتر من الثرومبين لتثبيت السقالة في مكانها. مع إزالة الجافية والتخلص من السديلة العظمية من نافذة الجمجمة بالفعل ، أغلق الجرح عن طريق إغلاق الجلد ووضع الغراء الجراحي. قم بإزالة من مخدر استنشاق واتركه يتعافى على سطح ساخن.