وضع العلامات الفلورية لخلايا الورم الدبقي: طريقة تعداء قائمة على ناقلات الفيروسات النسبية للحصول على خلايا الورم الدبقي التي تعبر عن البروتين الفلوري لتصوير الأنسجة العميقة

يتضمن

تصوير سرطان الدماغ في الجسم الحي حقن الخلايا السرطانية ذات العلامات الفلورية في دماغ الفأر لمراقبة تطور الورم. لوضع العلامات الفلورية ، احتضان خلايا الورم الدبقي بجزيئات الفيروس العسسي. يحمل ناقل الفيروس العدسي جين بروتين الفلورسنت بالأشعة تحت الحمراء ، iRFP.

يرتبط الفيروس بسطح خلية الورم الدبقي ويطلق الحمض النووي الريبي في الخلية. تقوم الإنزيمات الخلوية بتحويل الحمض النووي الريبي الفيروسي إلى حمض نووي مزدوج الشريطة ، والذي يندمج في الجينوم الخلوي ويسمح بتعبير iRFP. تقع الحد الأقصى للإثارة والانبعاث في iRFP داخل منطقة الأشعة تحت الحمراء القريبة حيث تتمتع الأنسجة بالحد الأدنى من الامتصاص والتشتت. هذا يسمح بتصوير الأنسجة العميقة بدقة.

بعد ذلك ، قم بإزالة الوسط المستهلك وأضف التربسين. يقوم التربسين ، وهو إنزيم بروتياز ، بهضم بروتينات الالتصاق ، ويفصل الخلايا عن سطح القارورة. الماصة بشكل متكرر لفصل الخلايا الفردية. اجمع تعليق الخلية في أنبوب وجهاز طرد مركزي. الآن ، أضف عازلة مناسبة لإعادة تعليق الحبيبات.

قم بتوزيع معلق الخلية في أنابيب قياس التدفق الخلوي وصمة عار الخلايا بصبغة فلورية ، DAPI. يلطخ DAPI نواة الخلايا الميتة باللون الأزرق الفاتح ، ويميزها عن الخلايا الحية. باستخدام فارز الخلايا المنشط بالفلورة أو FACS ، قم بفرز الخلايا الإيجابية iRFP الحية من مجموعات الخلايا الأخرى ب