مقايسة هجرة الخلايا الجذعية لأورام الدماغ (BTSC) لدراسات العلاج من تعاطي المخدرات: تقنية تصوير الخلايا الحية في المختبر لتحليل تأثير العلاج الدوائي على هجرة الخلايا الجذعية السرطانية

يمكن للخلايا الجذعية لأورام الدماغ أو BTSCs ، وهي مجموعة سكانية فرعية لخلايا ورم الدماغ ، أن تبدأ نمو الورم والورم الخبيث ، مما يجعلها أهدافا واعدة لعلاج السرطان. لدراسة تأثير الأدوية على هجرة BTSC في المختبر ، أولا ، قم بإعداد معلقات موحدة ل BTSCs في وسط مناسب. عالج أحد المعلقات بالدواء المعني.

وفي الوقت نفسه ، احصل على صفيحة الانجذاب الكيميائي متعددة الآبار تتكون من إدخالات غشائية تفصل كل بئر إلى غرف علوية وسفلية. أرادت الماصة بروتين المصفوفة خارج الخلية إلى الغرف السفلية والإدخالات الغشائية. احتضان لتسهيل بلمرة البروتين.

أضف وسطا قاعديا مناسبا يحتوي على الجاذب الكيميائي المطلوب إلى الغرف السفلية وضعه فوق الإدخالات الغشائية. بعد ذلك ، قم بزرع معلق BTSC المعالج بالأدوية وغير المعالج في إدخالات غشائية. قم بتصوير اللوحة لفترة طويلة باستخدام الفحص المجهري للخلايا الحية.

في الثقافة ، تلتزم BTSCs بمصفوفة البروتين الخاصة بالإدراج. استجابة لتدرج تركيز الجاذب الكيميائي الذي تم إنشاؤه بين الغرف العلوية والسفلية ، تهاجر BTSCs غير المعالجة عبر مصفوفة البروتين من خلال مسام إدخال الغشاء إلى الغرفة السفلية.

ومع ذلك ، فإن العلاج الدوائي يؤثر سلبا على النشاط الوظيفي للخلايا ، مما يقلل من هجرة BTSC. الآن ، باستخدام البرامج المناسبة ، قم بتحليل وتحديد BTSCs التي تم ترحيلها في الغرف السفلية. تظهر BTSCs غير المعالجة هجرة متزايدة ، بينما تظهر BTSCs المعالجة بالأدوية هجرة منخفضة.

لتقييم آثار العلاج الدوائي ذي الأهمية على الهجرة ، أولا ، قم بمعالجة الخلايا مسبقا بالتركيز المناسب للدواء لفترة تجريبية مناسبة. لتحضير لوحة الانجذاب الكيميائي ، قم بتغطية ثلاثة آبار إدراج غشائية وثلاثة آبار خزان سفلية لكل حالة من لوحة الانجذاب الكيميائي المكونة من 96 بئرا مع 75 و 225 ميكرولتر من 0.2 ملليغرام لكل مليلتر من الكولاجين من النوع الأول ، على التوالي ، لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية.

في نهاية الحضانة ، قم بشفط محلول الكولاجين من كل بئر دون خدش طلاء الكولاجين واغسل الآبار مرتين باستخدام PBS المعقم. بعد الغسيل الأخير ، قم بإزالة الملحق من اللوحة وأضف 225 ميكرولترا من الوسائط الخالية من عامل النمو المكملة بنسبة 10٪ FBS إلى كل بئر خزان سفلي من لوحة الانجذاب الكيميائي.

بعد ذلك ، أعد الملحق العلوي برفق إلى الخزان السفلي بزاوية لتجنب تكوين فقاعات وأضف 2.5 مرة 10 إلى BTSCs الثالثة المنفصلة في 50 ميكرولترا من الوسائط الخالية من عامل النمو لكل بئر. من المهم فصل BTSCs بالكامل إلى خلايا مفردة وحسابها بعناية قبل الطلاء لتجنب وجود كتل خلوية أو عدد كبير جدا من الخلايا في الملحق العلوي.

لتصوير ترحيل BTSC على طول تدرج FBS ، ضع اللوحة في نظام تصوير الخلايا الحية واضبط برنامج التصوير الآلي للحصول على صور مجهرية للوحة كل 1 إلى ساعتين لمدة تصل إلى 72 ساعة. عند اكتمال الحصول على الصورة ، حدد تعريف معالجة جديدا لتمييز BTSCs عن مسام إدخالها على الجانب السفلي من الغشاء ، وتعديل التحليل إذا لم يميز الخلايا بدقة عن غشاء الخلفية حسب الضرورة.

لتحديد الخلايا التي هاجرت عبر المسام ، اجمع البيانات كمساحة سطح الخلية على الجانب السفلي من الغشاء لكل من الآبار الثلاثة المكررة لكل حالة. بعد ذلك ، قم برسم بياني لهجرة الخلايا حيث هاجرت مساحة الخلايا بالميكرومتر المربع بمرور الوقت.