مقايسة غزو الغلاف العصبي لورم الدماغ (BTSC): اختبار في المختبر لتحليل تأثير العلاج بالعقاقير على غزو BTSC من المحيط العصبي

تمتلك الخلايا الجذعية لأورام الدماغ أو BTSCs - وهي مجموعة فرعية من الخلايا داخل أورام الدماغ - قدرات التجديد الذاتي وتساهم في تطور الورم ومقاومة العلاج. لتحديد تأثير الأدوية على غزو BTSC في المختبر ، ابدأ بتعليق BTSC في وسط مناسب في قوارير الاستزراع. عالج أحد المعلقات بالدواء المعني.

احتضان القوارير. تعزز مكونات الوسائط تكاثر الخلايا. تظل الخلايا معلقة ، وبالتالي تشكل مجموعات كروية تسمى المجالات العصبية. عند الوصول إلى الحجم المطلوب ، اجمع المجالات العصبية. اسمح لهم بالترسيب عن طريق الجاذبية وإزالة الوسائط. بعد ذلك ، قم بإعادة تعليق المجالات العصبية غير المعالجة والمعالجة بالأدوية في وسط مبرد يحتوي على بروتين مصفوفة مناسب خارج الخلية والدواء.

ضع المعلقات في لوحة مبردة متعددة الآبار. اسمح للمجالات العصبية بالترسيب في قاع البئر للحصول على تصوير أفضل. بعد ذلك ، احتضن بلمرة بروتين المصفوفة ، وتضمين المجالات العصبية بداخلها. تصوير المجالات العصبية لفترة طويلة باستخدام الفحص المجهري للخلايا الحية. في الثقافة ، تفرز BTSCs المدمجة إنزيمات محللة للبروتين ، مما يؤدي إلى تحلل بروتينات المصفوفة ، مما يتيح هجرة الخلايا.

بمرور الوقت ، يؤدي تدهور المصفوفة المتزايد إلى إنشاء بيئة مكروية مناسبة لغزو BTSC من المجالات العصبية إلى المصفوفة المحيطة. باستخدام برنامج مناسب ، قم بقياس المساحة الإجمالية للغلاف العصبي في نقاط زمنية مختلفة. تظهر BTSCs غير المعالجة مساحة سطح متزايدة ، مما يشير إلى زيادة معدل الغزو مقارنة ب BTSCs المعالجة بالدواء.

لتقييم غزو الغلاف العصبي BTSC ، أولا ، أضف المركب المثير للاهتمام إلى القارورة بالتركيز المطلوب للدورة الزمنية المحددة مسبقا قبل طلاء غزو الغلاف العصبي. عندما يصل متوسط حجم الغلاف العصبي إلى حوالي 150 إلى 200 ميكرومتر ، قم بقلب القارورة واخلطها برفق مع ماصة ، وانقل 500 ميكرولتر من المجالات العصبية BTSC المعلقة إلى أنبوب واحد سعة 1.5 ملليلتر لكل حالة تجريبية على الجليد.

استنشق أكبر قدر ممكن من الوسائط من أسفل كل أنبوب سعة 1.5 مليلتر دون أن تفقد حبيبات الغلاف العصبي وأعد تعليق المجالات العصبية برفق في 500 ميكرولتر من محلول الكولاجين الطازج 0.4 ملليغرام لكل مليلتر من النوع الأول. انقل 100 ميكرولتر من المجالات العصبية المعلقة بالكولاجين إلى ثلاثة آبار لكل حالة إلى صفيحة جديدة مكونة من 96 بئرا على الجليد واترك المجالات العصبية تستقر لمدة 5 دقائق.

من الأهمية بمكان السماح للمجالات العصبية بالاستقرار لمدة 5 دقائق على الجليد. خلاف ذلك ، لن تكون المجالات على نفس مستوى التركيز للتصوير. بعد 5 دقائق من بلمرة الكولاجين في حاضنة زراعة الخلايا ، انقل اللوحة إلى صينية نظام تصوير الخلايا الحية للحصول على صورة مرجعية لحجم الغلاف العصبي في وقت الطلاء قبل بدء الغزو. بعد ذلك ، اضبط البرنامج للحصول على الصور كل 1 إلى 2 ساعة حتى يستقر معدل الغزو ، عادة بمقدار 24 ساعة.

لتصوير مساحة السطح المتزايدة ل BTSCs أثناء غزوها للمصفوفة بمرور الوقت ، استخدم هدف 10x للحصول على أربع صور لكل بئر لكل مجموعة من ثلاثة آبار مكررة. لتحديد مساحة سطح الخلية النسبية الممثلة على أنها النسبة المئوية للتقاء البئر ، قم بإعداد تعريف معالجة يسلط الضوء على الخلايا على خلفية البئر على وجه التحديد. بعد ذلك ، اجمع البيانات كإجمالي مساحة سطح الخلية لكل بئر في كل نقطة زمنية. حدد متوسط الآبار الثلاثة المكررة ورسم بياني لغزو BTSCs عن طريق رسم مساحة الخلية المتزايدة بمرور الوقت.