الزراعة المشتركة لخلايا الورم الأرومي الدبقي على الخلايا العصبية المنقوشة: تقنية لمراقبة هجرة خلايا الورم الأرومي الدبقي على الخلايا العصبية في الحصين في الفئران في المختبر

يمتلك الورم الأرومي الدبقي خلايا شبيهة بالجذع تهاجر على طول المسالك المحورية للخلايا العصبية النخاعية لغزو مواقع بعيدة في الدماغ. لتلخيص هجرة الورم الأرومي الدبقي أو خلايا GBM على الخلايا العصبية في المختبر ، ابدأ بأخذ غطاء زجاجي.

قم بتنشيط الغطاء عن طريق معالجة بلازما الأكسجين وقم بتجهيزه بعامل وظيفي. يدعم هذا العلاج سهولة الوصول إلى المواد الكيميائية في الخطوات اللاحقة. أضف محلول PEGylated إلى الغطاء واحتضانه. يغطي هذا المحلول الغطاء ويمنع التصاق الخلايا العصبية في أماكن عشوائية.

قم بتوزيع بوليمر البادئ الضوئي على الغطاء وقم بتثبيته في غرفة التصوير. ضع الغرفة على مسرح المجهر الفلوري. بمجرد الدخول ، تنشط إضاءة الأشعة فوق البنفسجية جزيئات البادئ الضوئي محليا في المناطق المحددة المقابلة للأنماط الدقيقة المتصورة.

تشق جزيئات البادئ الضوئي المنشطة طبقة PEG الأساسية ، مما يولد النمط المطلوب. الآن ، أضف محلول اللامينين واحتضنه. يترسب اللامينين - وهو بروتين سكري - في أماكن محددة حيث تمت إزالة طبقة PEG. قم بزرع الوسائط التي تحتوي على الخلايا العصبية الحصين للفئران على الغطاء.

احتضان للسماح بالتصاق الخلايا العصبية بالمصفوفات المطلية باللون اللامينين للحصول على أغطية ذات نمط دقيق للخلايا العصبية. قم بإيداع تعليق من خلايا GBM ذات العلامات الفلورية فوق الخلايا العصبية ذات النمط الدقيق. صورة لرؤية خلايا GBM الفلورية تهاجر على الخلايا العصبية.

لعمل ركيزة للزخرفة الدقيقة ، قم بمعالجة الأغطية الزجاجية الدائرية مقاس 18 ملم عن طريق الهواء أو تنشيط البلازما لمدة 5 دقائق قبل وضع الأغطية في مجفف مع 100 ميكرولتر من 3-أمينوبروبيل ثلاثي إيثوكسيسيلان لمدة 1 ساعة. بعد ذلك ، احتضان محلول Peg-SVA بمعدل 100 ملليغرام لكل مليلتر لمدة ساعة واحدة لترسب الجل. في نهاية الحضانة ، أضف 3 ميكرولترات من PLPP و 50 ميكرولترا من الإيثانول المطلق في وسط الشريحة وانتظر حتى يجف تماما.

للتزيين الدقيق للشريحة الزجاجية ، قم بتركيب الغطاء في غرفة Ludin وضع الغرفة على مسرح المجهر المجهز بنظام التركيز التلقائي. بعد التصوير ، قم بتحميل الصور ذات النمط الدقيق في البرنامج. بعد التسلسل التلقائي للإضاءة فوق البنفسجية، استخدم ماصة لغسل PLPP من الغطاء على نطاق واسع باستخدام PBS. بعد ذلك ، احتضن الغطاء ب 50 ميكروغرام لكل مليلتر من اللامينين لمدة 30 دقيقة ، متبوعا بغسل آخر باستخدام PBS كما هو موضح.

لإعداد ثقافة الخلايا العصبية الحصين للفئران الجنينية على الطبقات ذات الأنماط الدقيقة ، بعد الغسيل الأخير ، أعد ترطيب الشرائح الزجاجية بوسط زراعة الخلايا العصبية. بذرة 5 مرات 10 إلى الخلايا العصبية الحصينية الرابعة للفئران معلقة في وسط عصبي قاعدي مخصب بنسبة 3٪ مصل حصان لكل سنتيمتر مربع على كل غطاء منقوش لمدة 24 ساعة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية. تقوم أجهزة الطرد المركزي بفصل خلايا الورم الأرومي الدبقي لمدة 5 دقائق عند 1,000 دورة في الدقيقة وإعادة تعليق الحبيبات في وسط زراعة خلايا الورم الأرومي الدبقي. ثم قم بإيداع 1 في 10 في خلايا GBM الثالثة فوق الخلايا العصبية ذات النمط الدقيق.