JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 4:21 د • July 8th, 2025
في الجهاز العصبي المركزي ، تكون الخلايا السمحاقية خلايا متعددة الوظائف تغلف الخلايا البطانية ، والتي تشكل البطانة الخلوية الداخلية للشعيرات الدموية. تساعد الحمضات في تنظيم تدفق الدم والحفاظ على توازن الدماغ.
لعزل التمويح ، ابدأ بأخذ الشعيرات الدموية المجمدة في الدماغ البقري في قارورة. بعد الذوبان ، انقل المحتويات إلى أنبوب يحتوي على الوسائط المطلوبة. جهاز طرد مركزي لحبيبات الشعيرات الدموية. قم بإزالة المادة المطفية المحتوية على وسائط التجميد. أعد تعليق الحبيبات الشعرية في الوسائط وبذر المعلق في قارورة مغلفة بالبروتين خارج الخلية.
احتضان للسماح للشعيرات الدموية بالالتصاق بالطلاء الموجود في القارورة. استبدل الوسائط بوسائط تحتوي على الهيبارين. في الثقافة ، يشجع طلاء بروتين المصفوفة خارج الخلية الخلايا الحضاقية على الهجرة بعيدا عن الشظايا الشعرية والتكاثر ، بينما يحفز الهيبارين هجرة الخلايا البطانية.
استبدل الوسائط المستهلكة بوسائط تحتوي على الهيبارين. بمرور الوقت ، تعرض الحضوج عمليات ممدودة تلتصق بقوة بالقارورة. مع مساحة الركيزة المحدودة ، تتكاثر الخلايا البطانية وتشكل طبقة أحادية مثبطة للتلامس. عند تحقيق كثافة الحمض المناسبة ، قم بإزالة الوسائط وغسل القارورة بالعازلة.
استخدم التربسين EDTA لفصل الخلايا البطانية غير المرتبطة بالربطة عن القارورة. بعد ذلك ، أضف وسائط لتحييد نشاط التربسين-EDTA. يغسل بالوسائط بشكل متكرر لإزالة الخلايا البطانية المنفصلة. أضف الوسائط وتأكد من بقاء التمويح ملتصقة بالقارورة. احتضان الثقافة المخصبة بالخلايا الحمضية للتكاثر.
ابدأ بإذابة قارورة واحدة من الشعيرات الدموية في حمام مائي 37 درجة مئوية. بمجرد ذوبان الشعيرات الدموية ، انقلها إلى أنبوب طرد مركزي يحتوي على 30 مل من DMEM-comp وقم بطردها لمدة 5 دقائق عند 500 × جم. ثم قم بإزالة الوسيط من الأنبوب وأعد تعليق الحبيبات في 10 مل من DMEM-comp الطازج. انقل التعليق إلى قارورة T75 مطلية واترك الشعيرات الدموية تلتصق بالقاع لمدة 4 إلى 6 ساعات في حاضنة 37 درجة مئوية مزودة ب 10٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد الحضانة ، افحص القارورة تحت المجهر الضوئي.
يجب الآن ربط أجزاء من الشعيرات الدموية بالجزء السفلي من القارورة. في اليوم 4 ، بعد بذر الشعيرات الدموية ، افحصها تحت المجهر للتأكد من أنها تتلاقى حوالي 60٪ إلى 70٪. استنشق الوسط واغسل الخلايا برفق باستخدام PBS. أضف 2 مل من Trypsin-EDTA المذاب واترك القارورة في الحاضنة لمدة 1 إلى 3 دقائق ، مع إخراج القارورة بشكل متكرر ومراقبة انفصال الخلية بالمجهر. عندما تبدأ الخلايا البطانية في الالتقارب، اضغط برفق على القارورة لفصلها.
عندما تنفصل الخلايا ، توقف عن التربسينية عن طريق إضافة 10 ملليلتر من DMEM-comp إلى القارورة. اغسل القارورة عدة مرات بالوسط واستنشق معلق الخلية البطانية ، والذي يمكن استخدامه الآن لأغراض أخرى. أضف 10 ملليلتر من DMEM-comp إلى القارورة وافحصها تحت المجهر الضوئي للتأكد من أن التمويح لا يزال موجودا ومتصلة بالأسفل. بعد ذلك ، ضع القارورة مرة أخرى في الحاضنة للسماح للثقافة المخصبة بالحمام بالنمو.
تتناول هذه المقالة عزل واستزراع الخلايا حول الوعائية (pericytes) من الشعيرات الدموية في دماغ البقر. تلعب الخلايا حول الوعائية دوراً محورياً في تنظيم تدفق الدم والحفاظ على التوازن الداخلي للدماغ.
إن العزل والزراعة الموثوقة للخلايا الحولية الدقيقة الأولية في الدماغ دون تلوث بطاني يلبي حاجة ماسة لنماذج مخبرية ذات صلة بالأمراض في أبحاث الأوعية الدموية العصبية. وتعزز هذه القدرة الثقة التنبؤية في مرحلة الاكتشاف المبكر والتحقق من الأهداف لتطوير أدوية الجهاز العصبي المركزي. وتدعم هذه الطريقة الاستمرارية الانتقالية من خلال تمكين الدراسات الميكانيكية حول وظيفة الخلايا الحولية الدقيقة والتفاعلات الوعائية العصبية.
تتناسب طريقة عزل الخلايا الحولية هذه مع المرحلة الفاصلة بين الاكتشافات الأولية وتطوير النماذج قبل السريرية، مما يوفر أساساً لعمليات الفرز اللاحقة والدراسات الآلية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026