التصوير بالزيموغرافية للببتيد الفلوري: تقنية معدلة للكشف عن نشاط البروتياز باستخدام ركائز الفلورية في المواد الهلامية للزيموغرام

التصوير بالزيفوغرافيا هو تقنية كهربائية تتضمن ركيزة بروتينية مبلمرة مع هلام بولي أكريلاميد للكشف عن الإنزيمات المحللة للطاقة المائية ونشاطها. للبدء ، قم بإذابة العينات في مخزن مؤقت لتصوير الزيموغرافية يحتوي على الجلسرين وكبريتات دوديسيل الصوديوم أو SDS والبروموفينول الأزرق.

يجعل الجلسرين عازلة العينة أكثر كثافة من المخزن المؤقت المحيط للهلام ، مما يتيح سهولة التحميل في جيوب الجل. SDS - منظف أنيوني - يفسد طبيعة الإنزيمات الموجودة في العينة ويغطيها بشحنة سالبة. يساعد البروموفينول الأزرق - صبغة تتبع - على مراقبة تقدم العينة في الجل.

قم بتحميل العينات في هلام بولي أكريلاميد مدمج بركائز فلوروجينيك للكشف عن نشاط البروتياز. الآن ، قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية وابدأ الرحلان الكهربائي. يتسبب المجال الكهربائي المتولد في هجرة جميع الإنزيمات المرتبطة ب SDS عبر الهلام باتجاه القطب موجب الشحنة.

بعد الانتهاء من الرحلان الكهربائي ، قم بإزالة الجل واغسله في مخزن مؤقت يحتوي على منظف غير أيوني يزيح SDS للسماح بإعادة تكوين الإنزيم. بعد ذلك ، احتضان الجل في مخزن مؤقت نامي يحتوي على كاتيونات ثنائية التكافؤ تنشط الإنزيمات الموجودة في الجل.

تشق البروتياز النشط ركائز الفلوروجين ، مما يتسبب في زيادة التألق. قم بتصوير الجل لمراقبة نطاقات البروتين الفلورية التي تتناسب شدتها مع نشاط البروتياز.

للبدء ، قم بإذاب