في توصيل الجينات القائم على التثقيب الكهربائي في الرحم: تقنية لحقن الحمض النووي البلازميد في الخلايا المخيخية الجنينية لأجنة الفئران

ابدأ بأخذ نموذج فأر مخدر حامل يوضع في وضع ضعيف. تحضير الماوس عن طريق إزالة الشعر من منطقة البطن. شق الجلد وطبقات العضلات الأساسية لفضح قرون الرحم - المواقع التي تستضيف أجنة قابلة للحياة.

الآن ، اسحب قرون الرحم من تجويف البطن. خذ شعيرات دموية زجاجية ذات طرف حاد تحتوي على محلول الحمض النووي البلازميد المطلوب. حدد موقع دماغ الجنين وحقن محلول الحمض النووي البلازميد من خلال جدار الرحم في البطين الرابع. هذا الموضع هو الأمامي للمخيخ الأولي - الموقع المطلوب لتسليم الحمض النووي في نهاية المطاف.

بعد الحقن ، اسحب الشعيرات الدموية الفارغة. بعد ذلك ، من أجل التثقيب الكهربائي للجنين المحقون بالحمض النووي ، ضع القطبين فوق جدار الرحم بحيث يغطي القطب الموجب البدائية المخيخية ويغطي القطب السالب المنطقة المحيطة بالأذنين.

تطبيق نبضات كهربائية للمدة المطلوبة. هذه النبضات تجعل الخلايا العصبية المخيخية قابلة للاختراق ، مما يسمح للحمض النووي البلازميد بدخول الخلايا المستهدفة. أخيرا ، ضع قرون الرحم مرة أخرى داخل تجويف البطن في موضعها الطبيعي. قم بخياطة الجروح ، وانقل الماوس إلى قفصه ، واتركه يتعافى.

ابدأ بتحميل الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات في مجتذب ماصة دقيقة وسحبها لإنشاء طرف رفيع. قم بتسمية الطرف الشعري بالحبر الأسود للحصول على تصور أفضل أثناء الحقن وارسم تحجيما على الزجاج. من خلال العمل تحت الم