موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:51 دقيقة • July 8th, 2025
يمكن للخلايا السرطانية أن تتحرك من موقعها الأصلي وتغزو الأعصاب المحيطة في عملية تسمى الغزو حول العصب أو PNI. لوحظ PNI في نموذج حيواني عن طريق حقن الخلايا السرطانية في عصب رئيسي مثل العصب الوركي ، والذي يتم استخراجه بعد ذلك لفحص مدى الغزو.
للبدء ، قم بإعداد فأر قتل رحيم تم حقنه مسبقا بالخلايا السرطانية في وضع الانبطاح. قم بإزالة الغرز من الطرف الخلفي - موقع حقن الخلايا السرطانية لفضح العصب الوركي الذي يعصب عضلات الأطراف الخلفية.
استخدم المقص لفصل العضلات وفضح العصب الوركي الأساسي. قم بتشريح الأطراف العصبية لعزلها عن الجسم. الآن ، استخدم الفرجار لقياس وتسجيل المدى العياني لغزو الخلايا السرطانية.
بعد ذلك ، ضع العصب المقطوع في وسط تضمين لتمكين تحضير العينة في درجات حرارة منخفضة. باستخدام ميكروتوم ناظم البرد ، قم بقص أجزاء رقيقة من العصب المضمن وضعها على شريحة. تلطخ الشريحة بصبغة نسيجية هيماتوكسيلين يوزين.
الهيماتوكسيلين - صبغة أساسية - تلطخ المكونات الحمضية مثل النوى ، بينما يوزين - صبغة حمضية - يلطخ المكونات الأساسية مثل السيتوبلازم. راقب الشريحة تحت المجهر لقياس طول ومساحة الغزو العصبي.
في اليوم 7 بعد الجراحة ، ضع الفأر القتل الرحيم على جانبه البطني وقم بتثبيت الأطراف البعيدة باستخدام المسامير. بعد إزالة الجلد على الجانب الظهري من الطرف والجذع المحقون ، استخدم تشريحا حادا لتعريض العصب الوركي بعمق العضلات.
للوصول إلى العصب في منطقة الحبل الشوكي ، افصل الحرقفة عن العجز عن طريق إدخال مقص مغلق في المنطقة الضيقة حيث يوجد العصب الوركي ، ثم افتح المقص أثناء الإمساك بالماوس. قم بتشريح العصب الوركي بعناية بعيدا إلى نهاية عظم الفخذ وبالقرب من الحبل الشوكي.
يعد التعامل الدقيق أمرا ضروريا لأن الأعصاب التي تم غزوها هشة للغاية وعرضة للكسر تحت التوتر أو التعامل القوي. كن حساسا وحافظ على سلامة العصب الوركي أثناء التشريح.
احصد العصب عن طريق قطع نهايته البعيدة أولا. ارفع العصب بعناية مع تحريره من الأنسجة المجاورة. قطع العصب في الطرف القريب قدر الإمكان من خروجه من العمود الفقري. استخدم الفرجار الورني لتقدير الطول الإجمالي للغزو. ابدأ المعالجة عن طريق تضمين العصب المقطوع في مركب OCT. ضع الأعصاب طوليا ومسطحا في قاع القالب قدر الإمكان.
حدد على الكاسيت الجانب القريب والبعيد من العصب بوضع علامة على الحرفين P و D. ثم ضع الأعصاب المضمنة فوق الثلج الجاف. عينات القسم باستخدام ميكروتوم Cryostat بسمك 5 ميكرون ووضع أقسام على شرائح زجاجية. إذا أمكن ، قم بتركيب قسمين عصبيين لكل شريحة. يشير إلى الجانب القريب من العصب. بعد تلطيخ الشرائح باستخدام H & E والحصول على الصور باستخدام ماسح ضوئي للشرائح ، استخدم برنامج التصوير لتحديد طول الغزو.