زرع تقويم العظام طويل الأمد للخلايا السرطانية في أجنة الزرد: طريقة فعالة لتوصيل الخلايا السرطانية إلى البطين الرابع من أجنة الزرد لتحليل طويل الأمد لسلوك الخلايا السرطانية

أثناء زراعة تقويم العظام ، يتم زرع الخلايا السرطانية أو الأنسجة من متبرع حامل للورم في الأنسجة المقابلة لمتلقي من نفس النوع. أولا ، قم بإعداد تعليق موحد - في مخزن مؤقت مناسب - لخلايا ورم الدماغ ذات العلامات الفلورية التي يتم حصادها من سمكة الزرد الحاملة للورم. باستخدام طرف تحميل الجل الناعم ، قم بتحميل معلق الخلية هذا في إبرة الحقن المجهري.

بعد ذلك ، قم بتأمين الإبرة المحملة في حامل جهاز المعالجة الدقيقة. بعد ذلك ، قم بنقل جنين الزرد المخدر إلى صفيحة حقن مسبقة الصنع. لسهولة الوصول أثناء الحقن المجهري ، ضع الجنين بشكل جانبي لتصور بطينات الدماغ - وهي شبكة من التجاويف المملوءة بالسائل النخاعي داخل الدماغ.

اضبط طرف الإبرة لحقن معلق الخلية السرطانية في البطين الرابع ، وهو التجويف على شكل ماسي للدماغ الخلفي للجنين. تشغل الخلايا السرطانية المساحة المجوفة داخل البطين. اسحب الإبرة. انقل الجنين إلى طبق مزرعة يحتوي على محلول ملحي. راقب الجنين تحت مجهر مجهر فلوري لتأكيد وجود الخلايا السرطانية داخل مساحة البطين.

احتضان الجنين. في غضون ساعات من الحقن ، تهاجر الخلايا السرطانية وتغزو أنسجة المخ المحيطة ، حيث تتكاثر بعد ذلك مما يؤدي إلى ظهور أورام جديدة. بمرور الوقت ، تتكاثر الخلايا السرطانية وتغزو أكثر ، وتنتشر في جميع أنحاء الدماغ.

باستخدام ماصة نقل، انقل 10 إلى 20 جنينا مخدرا إلى محيط لوحة الحقن. يجب أن تسقط الأجنة بشكل جانبي مع ظهور البطينين بوضوح ويمكن الوصول إليه. استخدم مسبارا بزاوية لضبط الأجنة حسب الحاجة ووضعها بعيدا عن الحافة الخارجية للوحة الحقن.

بعد ذلك، استخدم طرف تحميل الهلام لتحميل 1 إلى 2 ميكرولتر من تعليق الخلية السرطانية في إبرة الحقن وإدخال الإبرة في المعالج. بعد ذلك ، قم بخفض المناور يدويا ، مع إمساك الإبرة بزاوية 45 درجة. اضبط مقابض المعالج الدقيق في الاتجاهات x و y و z حتى تصبح الإبرة أعلى بقليل وحوالي 5 ملليمترات على يمين رأس الجنين.

باستخدام المجهر المجسم ، اضبط المعالج الدقيق ببطء في الاتجاه x حتى تخترق الإبرة البطين الرابع للجنين. لا تدع الإبرة تخترق القلب أو صفار البيض. للحقن المتسقة ، يجب تخدير الأجنة. يجب فصل الورم بشكل صحيح في معلق خلوي ويجب أن تخترق الإبرة البطين الرابع ولكن لا تمتد إلى القلب.

ادفع دواسة قدم الحاقن الدقيق لحقن تعليق الخلية السرطانية. عند الانتهاء من الحقن، استخدم ماء البيض العذب لشطف الأجنة المحقونة برفق من لوحة الحقن وفي طبق بتري. الآن ، افحص الأجنة المحقونة تحت مجهر مجسم مضان في غرفة مظلمة. تأكد من أن ضغط الحقن والزاوية وحجم الإبرة ولزوجة تعليق الخلية تؤدي إلى امتلاء الخلايا السرطانية بنسبة 25٪ إلى 50٪ من مساحة البطين.

ضع الأجنة مرة أخرى في حاضنة 28 درجة مئوية طوال الليل. في اليوم التالي ، قم بتقييم بقاء الجنين من خلال فحص السمات المورفولوجية والفسيولوجية ، مثل النمو الطبيعي للقلب والدماغ ، كما هو موضح سابقا.