تحريض الورم الأرومي الدبقي باستخدام التبديل بوساطة SB: تقنية لتوليد نموذج فأر جديد باستخدام التكامل بوساطة الينقولات لبلازميد SB في دماغ الفأر حديثي الولادة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:11 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بأخذ أنبوب يحتوي على مزيج من البلازميدات. تم تصميم البلازميد النائم أو الينقولات SB لحمل عنصر قابل للنقل يشتمل على جين ورمي مسرطن مشتق من الإنسان محصور بين تسلسلين متكررين مقلوبين. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي هذا المزيج على بلازميد SB transposase الذي يحتوي على عنصر تعبير عن إنزيم الترانسبوزياز.
الآن ، أضف كاشف تعداء مناسبا إلى الأنبوب. استنشق مزيج الحقن في حقنة مزودة بإبرة دقيقة. بعد ذلك ، قم بتأمين جرو فأر مخدر في وضع الانبطاح على إطار تجسيم. تخيل منطقة رأس الجرو لتحديد موقع خيوط الجمجمة. ضع الإبرة الدقيقة فوق خيوط الجمجمة.
حقن المزيج في البطين الجانبي - تجويف داخل حمة الدماغ. بعد ذلك ، يتشتت المحلول في حمة الدماغ ، حيث تسهل جزيئات كاشف التعداء دخول البلازميدات داخل الخلايا. بمجرد دخوله الخلية ، يعبر بلازميد الترانسبوزاز عن جزيئات إنزيم الينقولاز ، والتي تتعرف على تسلسلات التكرار المقلوبة وتستأصل عنصر الينقولات.
ثم يعيد الحمض النووي للعنصر القابل للنقل دمج نفسه في منطقة تكرار TA من الحمض النووي الجيني للجرو. يؤدي التبديل الجيني إلى تحول مسرطن لخلايا الدماغ ، مما يؤدي إلى تطور الورم الأرومي الدبقي في دماغ الفأر.
قبل 3 إلى 4 أسابيع من التجربة ، قم بإعداد قفص تربية الفئران مع ذكر واحد وأنثى واحدة. قم بتضمين كوخ الإسكيمو البلاستيكي الملون لإثراء البيئة وزيادة فرص التزاوج. قم بإزالة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية