التثقيب الكهربائي خارج الجسم الحي لشرائح مخيخ جنين الكتكوت: طريقة لإدخال الحمض النووي البلازميد الذي يشفر البروتين الفلوري الأخضر لتصور تطور الخلايا الحبيبية

الخلايا الحبيبية المخيخية هي أكثر أنواع الخلايا العصبية وفرة في الدماغ. تتكون الطبقة الحبيبية الخارجية ، EGL ، فقط من سلائف الخلايا الحبيبية ، GCPs ، التي تتمايز وتنتقل إلى الداخل لتشكيل الطبقة الحبيبية الداخلية ، IGL.

لتصور تطور الخلايا الحبيبية ، قم بإعداد غرفة التثقيب الكهربائي عن طريق ربط أنود بقاعدة طبق بتري. أضف وسيط الثقافة لتغطية القطب. الآن ، ضع إدراج ثقافة على القطب الكهربائي المغطى بالمتوسط. انقل شرائح مخيخ جنين الفرخ إلى إدراج المزرعة في اتجاه سهمي.

يسمح المستوى السهمي بتحديد الطبقة المستهدفة - EGL مقابل طبقات المخيخ المختلفة. أضف محلول صبغة لزج يحتوي على الحمض النووي البلازميد GFP عبر EGL. يشفر الحمض النووي البلازميد GFP لبروتين فلوري أخضر يوزع بشكل متجانس داخل سيتوبلازم الخلية ويتيح تصوير الخلايا الحية.

بعد ذلك ، ضع الكاثود في الوسط بالقرب من مخطط كهربية الدماغ ولكن ليس مباشرة على الأنسجة. ثم قم بتطبيق نبضات كهربائية متعددة على مناطق مختلفة من EGL. تحفز النبضات الكهربائية مسام مؤقتة في غشاء الخلية ، مما يسمح للخلايا بامتصاص الحمض النووي البلازميد. بعد ذلك ، يتيح الحمض النووي البلازميد التعبير عن GFP في الخلايا الحبيبية.

قم بتصوير الشرائح المخيخية تحت المجهر الفلوري لمراقبة تمايز الخلايا الحبيبية ونمط الهجرة عبر مراحل مختلفة من تطور الخلايا.

قم ببناء غرفة التثقيب الكهر