عزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي: إجراء تدرج الكثافة لعزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي لحديثي الولادة للدراسات في المختبر

لعزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي، خذ عمودا فقريا لفأر حديثي الولادة وضعه على طبق بتري. اغسل العمود الفقري بمحلول ملحي لتحرير الحبل الشوكي. نقل الحبل الشوكي إلى وسط عصبي بارد لتعزيز بقاء الخلية.

بعد ذلك ، قم بفرم الحبل الشوكي ونقل الشظايا إلى أنبوب يحتوي على وسط عصبي جديد. احتضان الأنبوب في حمام مائي شاكر للتأقلم. بعد الحضانة ، قم بإزالة الوسط المستهلك وأضف وسط الهضم. تشق الإنزيمات الهاضمة مصفوفة الأنسجة لتفكيك الخلايا.

قم بإجراء التجربة عن طريق شفط شظايا الأنسجة في الماصة وتفريغ المكونات بسرعة ، وإطلاق الخلايا الفردية في التعليق. بعد ذلك ، قم بنقل هذا التعليق إلى أنبوب يحتوي على وسط تدرج الكثافة وجهاز طرد مركزي.

بعد الطرد المركزي ، تحتوي الطبقة السطحية للأنبوب على بقايا الأنسجة. تشمل الطبقة الأولى الخلايا قليلة التغصن والخلايا النجمية. تتكون الطبقتان الثانية والثالثة من الخلايا العصبية ، حيث تتمتع الطبقة الثالثة بأعلى نقاء. أخيرا ، تحتوي الحبيبات على خلايا دبقية صغيرة.

اجمع الطبقة الثالثة في أنبوب جديد وأضف وسطا عصبيا لتخفيف وسط تدرج الكثافة. جهاز طرد مركزي لتكوير الخلايا العصبية. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في وسط عصبي القاعدي للحفاظ على الخلايا العصبية لمزيد من التجارب.

لبدء هذا الإجراء ، افصل الرأس عن جسم صغار الفأر الرحيم باستخدام المقص. بعد ذلك ، قم بتثبيت ا