إزالة الخلايا القلبية الرئوية المعقدة: تقنية لإزالة الخلايا من القلب والرئتين من نموذج الفئران

يؤدي نزع الخلايا إلى إفراغ الأعضاء من مكوناتها الخلوية ، تاركا بنية ECM سليمة. هذا يساعد في الحفاظ على الهندسة المعمارية ثلاثية الأبعاد للأعضاء. لإجراء إزالة الخلايا ، ضع فأرة مرحمة في وضع ضعيف. تشريح الفأر وكشف المركب القلبي الرئوي.

ربط جميع الأوعية الرئيسية التي تنشأ من القلب باستثناء الشريان الأورطي والأوعية الدموية الرئوية الرئيسية. تمنع هذه الخطوة تسرب السوائل أثناء إجراء التروية اللاحقة. قم بإنشاء فتحة في القصبة الهوائية وأدخل قسطرة من خلال هذه الفتحة. قم بقسطرة الشريان الأورطي الهابط من الأسفل حتى تصل القسطرة إلى قوس الأبهر.

خياطة القسطرة لتأمين موضعها وتوصيلها بمضخة التروية. ابدأ التروية بالماء منزوع الأيونات. يسمح التروية من خلال الشريان الأورطي بإزالة الدم بكفاءة من الأوعية الدموية القلبية بأكملها. في النهاية ، يدخل الماء إلى الشريان الرئوي المؤدي إلى الرئتين.

بعد إزالة الدم تماما من الأوعية الدموية الرئوية ، أوقف نضح الماء واستبدله بمحاليل منظفات مختلفة تتراوح من خفيفة إلى قوية. يعمل هذا الإجراء على تحلل الخلايا التي تطلق المكونات داخل الخلايا ، مما يجعل القلب والرئتين يبدوان شفافين.

قم بتسخين الماء منزوع الأيونات مرة أخرى لإزالة أي جزيئات منظفات متبقية. قم بتخزين المركب القلبي الرئوي منزوع الخلايا في محلول يحتوي على المضادات الحيوية ، مما يضمن فترة صلاحية طويلة.

ابدأ بحلق الصدر والبطن والجزء الخلفي من الفأر القتل الرحيم باستخدام ماكينة قص الشعر. تطهير المنطقة بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، قم بتثبيت الفأر في صينية البوليسترين ، مع تمديد أطرافه الأمامية والخلفية ، وكذلك رأسه وذيله. ضعه تحت مجهر الجراحة المجهرية.

باستخدام مقص نمط مستقيم من Mayo ، قم بعمل شق جلدي يمتد من المنطقة تحت الفك السفلي إلى أسفل البطن وقم بتشريحه تحت الجلد لكشف جدار الصدر والصفاق. بعد ذلك ، استخدم مقص الجراحة المجهرية لقطع عضلات الصدرية الكبرى والعضلات الصدرية الصغرى على طول الفضاء الوربي السادس على جانبي جدار الصدر.

قطع القص على طول الشقوق السابقة بمقص نمط مستقيم. ثم أكمل بضع القص عن طريق قطع القص على طول محوره الطويل. ارفع وثبت جانبي الجدار الصدري لفضح المركب القلبي الرئوي. استخدم ملقطا دقيقا مستديرا لاستئصال الغدة الصعترية والأنسجة الدهنية المحيطة بها عن طريق سحبها بدقة من ملحقاتها وقطع المريء بمقص دقيق.

افصل الأوردة العضدية الرأسية والشريان العضدي مع ملقط دقيق حاد. بعد ذلك ، افصل الشريان السباتي المشترك الأيسر والشرايين تحت الترقوة اليسرى عن الأنسجة الأساسية لتسهيل الربط والكي. استخدم حامل إبرة دقيقة وملقط دقيق حاد وخياطة 9-0 لوضع غرز فوق ظهور الشريان السباتي العضدي والرأس السباتي المشترك والشرايين تحت الترقوة اليسرى. كي الأوردة العضدية.

باستخدام مقص دقيق ، افتح مدخلا عن طريق تقسيم الرباط. أدخل قسطرة قياس 27 في القصبة الهوائية وادفعها برفق حتى تتفرع القصبة الهوائية إلى الشعب الهوائية ، مع الحرص على عدم تعطيل الشعب الهوائية. باستخدام خياطة 6-0 ، ضع ثلاث غرز حول القصبة الهوائية لتأمين القسطرة.

قسم الفأر في ارتفاع الفقرة الصدرية 12. يمتد الشريان الأورطي الهابط إلى الأمام إلى العمود الفقري ويجب تقسيمه هنا مع العمود الفقري. قم بقسطرة الشريان الأورطي بشكل رجعي وادفع القسطرة حتى تصل إلى القوس الأبهري. باستخدام خياطة، ضع أربع غرز حول الشريان الأورطي تبدأ بمقدار 5 ملليمترات أسفل طرف القسطرة.

قم بتوصيل الماوس بنظام المضخة باستخدام أنابيب السيليكون والموصلات السفلية. قم بتسخين الماء منزوع الأيونات بسرعة 200 ميكرولتر في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك ، قم بتغيير عامل التروية إلى 0.5٪ DOC مخفف في الماء منزوع الأيونات ونقعه طوال الليل. في اليوم التالي ، قم بتغيير عامل التروية إلى 0.1٪ SDS مخفف في الماء منزوع الأيونات ونفخ لمدة 8 ساعات. ثم قم بتسخينه بالماء منزوع الأيونات لمدة 24 ساعة لغسل SDS و DOC.

استئصال القلب والرئتين منزوعة الخلايا عن طريق تقسيم ملحقاتهما بالصدر. قم بتخزين الأنسجة في أنبوب تبريد معقم في ماء منزوع الأيونات مع 1٪ بنسلين ستربتومايسين و 0.3 ميكرومولار أزيد الصوديوم عند 4 درجات مئوية.