حقن الفقاعات الدقيقة في أجنة الفئران المعزولة: تقنية لتوصيل عوامل تباين الفقاعات الدقيقة إلى الأوعية الدموية لأجنة الفئران الحية

لتوصيل الفقاعات الدقيقة ، ابدأ بتعليق موحد للفقاعات الدقيقة ذات القشرة الدهنية التي تستهدف الخلايا البطانية والتي تتكون من نواة غازية في حقنة متصلة بالأنبوب.

قم بتحميل هذه المجموعة في مضخة حقنة وقم بتوصيل إبرة زجاجية بالأنبوب. الآن ، انقل جنين فأر مبرد يعبر عن مستقبلات خلايا بطانية محددة إلى طبق يوضع على مسرح المجسم.

بإخراج الجنين برفق من كيس الصفار والغشاء الأمنيوسي. قم بتأمين الكيس وحواف المشيمة. اشطف الجنين بمحلول احترازي دافئ لاستعادة تدفق الدم. قم بتغطية الجنين بهلام الموجات فوق الصوتية الدافئ مسبقا لنقل الموجات فوق الصوتية الأمثل. مكمل مع عازلة للحفاظ على ظروفها الفسيولوجية.

قم بحقن تعليق الفقاعات الدقيقة بعناية بمعدل التدفق المطلوب في وريد مناسب على سطح غشاء الجنين لقرص المشيمة باستخدام مضخة المحقنة. تنتقل الفقاعات الدقيقة المحقونة عبر الدورة الدموية وترتبط بالمستقبلات المحددة على الخلايا البطانية المبطنة للأوعية الدموية.

استخدم محول طاقة بالموجات فوق الصوتية لنقل الموجات فوق الصوتية عالية التردد إلى الجنين. تتسبب نوى الغاز عالية الانضغاط في الفقاعات الدقيقة في تذبذب غير خطي ، مما يؤدي إلى تشتيت الموجات فوق الصوتية بترددات مختلفة عن الموجات الساقطة. تعود هذه الإشارات والإشارات الخطية للأنسجة إلى محول الطاقة.

يقوم محول الطاقة بنقلها إلى نظام تصوير يميز الإشارات المتناثرة للفقاعة الدقيقة عن إشارات الأنسجة ، مما ينتج عنه صور بالموجات فوق الصوتية المحسنة بالتباين للأوعية الدموية الجنينية.

الماصة الحجم اللازم من محلول مخزون الفقاعات الدقيقة وإضافة إلى كمية المحلول الملحي. تخلط عن طريق التقليب برفق بطرف الماصة. بعد ذلك ، استخدم إبرة قياس 21 لسحب محلول الفقاعات الدقيقة المخفف إلى حقنة نظيفة. بعد إزالة الإبرة ، تخلص من أي فقاعات هواء من المحقنة وقم بتوصيل اللور والأنبوب. ادفع المحلول ببطء إلى نهاية الأنبوب ، مع التأكد من عدم توليد أي فقاعات هواء.

أخيرا ، أدخل المحقنة في مضخة ضخ حقنة مضبوطة لتوزيع الفقاعات الدقيقة بمعدل 20 ميكرولتر في الدقيقة لحجم إجمالي يبلغ 20 ميكرولترا. قم بتوصيل إبرة زجاجية مسحوبة بنهاية الأنبوب. حرك المضخة بالقرب من مرحلة الحقن. استخدم ملعقة مثقبة لاختيار وإزالة جنين واحد بشكل عشوائي من طبق الوسائط المبردة. ضع الجنين في طبق تشريح موجود في مرحلة الموجات فوق الصوتية تحت المجسم

بعد ذلك ، حدد موقع جانب الجنين الذي يبدو الأقل وعائية. هذه منطقة ذات الأوعية الدموية المنخفضة ، مجاورة بشكل عام لمنطقة الرأس. بعد ذلك ، استخدم ملقطا دقيقا لقطع أو تمزيق ما يكفي من كيس الصفار والأغشية السلوية لتتمكن من إزالة الجنين من الداخل ، ولكن ليس أكثر. بعد ذلك ، قم بمناورة الكيس برفق من حول الجنين. بعد ذلك ، ضع الجنين على جانبه مع المشيمة والأوعية السرية في المقدمة.

قم بتثبيت طبق التشريح باستخدام قطع صغيرة من البلاستيسين. باستخدام أربعة دبابيس حشرية ، قم بتثبيت كيس الصفار وحواف المشيمة ، وتجنب أي أوعية رئيسية. باستخدام حقنة تحتوي على 45 درجة مئوية PBS مسخنة مسبقا ، اغسل الجنين حتى يمكن رؤية الدم يتدفق إلى الجنين. يتم التعرف على الشريان السري من خلال الدم الأحمر اللامع النابض. يحتوي الوريد السري وشبكة الأوعية الدموية المرتبطة به على دم أغمق وعادة ما يتراكب مع تلك الموجودة في الشريان السري على جانب المشيمة.

في هذه المرحلة ، ضع الطبق بحيث يمكن إجراء الحقن بشكل مريح. بمجرد إحياء الجنين ، قم بتغطيته ، ولكن ليس المشيمة ، بهلام الموجات فوق الصوتية الدافئ مسبقا. استخدم ملقطا دقيقا لإزالة أي فقاعات هواء بدقة من حول الجنين وقم بتعبئة الطبق ب PBS مسخن مسبقا. طوال الإجراء ، راقب مستوى المحلول في محاقن PBS والهلام وأضف محاقن احتياطية إلى دورق التسخين حسب الحاجة.

بعد ذلك ، قم بتركيب الإبرة الزجاجية على كرة كبيرة من البلاستيسين على حافة طبق التشريح وأدخل طرف الإبرة في PBS. اختر وريدا على السطح المشيمي للقرص المشيمي بعيدا عن الفرع الرئيسي قدر الإمكان. بعد ذلك ، استخدم المقص لقص طرف الإبرة ليتناسب مع حجم الوعاء ، وقطع الطرف بزاوية طفيفة. استخدم حافة مقص الزنبرك لإزالة أي حواف خشنة من الزجاج.

الآن ، باستخدام مضخة الحقنة ، قم بحقن محلول الفقاعات الدقيقة ببطء بمعدل 20 ميكرولتر في الدقيقة في الإبرة الزجاجية حتى يتم طرد كل الهواء من طرف الإبرة ويمكن رؤية الفقاعات الدقيقة تتدفق بحرية إلى PBS. أوقف المضخة وأعد ضبطها لحجم حقن يبلغ 20 ميكرولترا. لا تسمح للهواء بالدخول إلى إبرة الحقن لتجنب حقن الهواء في نظام الأوعية الدموية للجنين.

أدخل طرف الإبرة الزجاجية برفق في الوريد المحدد في المشيمة وتأكد من أنه غير متحرك. قم بتأرجح رأس المجسم بعيدا ووضع محول الطاقة بالموجات فوق الصوتية بحيث يقع الجنين بالتساوي بين البؤر عند 6 و 10 ملليمترات. بعد ذلك ، ابدأ التصوير وابدأ حقن بلعة الفقاعات الدقيقة. بعد دقيقة ، عند اكتمال الحقن ، ابدأ المؤقت لخطوة الحصول على البيانات.