موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:44 دقيقة • July 8th, 2025
للبدء ، ضع فأرة مخدرة في وضع الاستلقاء على لوح التشريح. قم بعمل شق للوصول إلى التجويف الصدري وفضح القلب. حدد موقع الشريان الأورطي وفروعه - الشريان السباتي المشترك الأيسر والشريان العضدي. قم بعبور هذه الشرايين لعزل القلب.
على الفور ، اغمر القلب المستأصل في طبق بتري يحتوي على محلول عازل مؤكسج غني بالمغذيات. في الوقت نفسه ، أدخل قنية في القلب بحيث يصل طرفها إلى الشريان الأورطي الصاعد. استخدم خياطة لربط القنية. قم بتوصيل القنية بحقنة تحتوي على محلول تروية مؤكسج.
حقن محلول التروية في القلب. تسمح هذه الخطوة للدم بمغادرة الشرايين التاجية والانبعاث من الأوردة الرئوية. بعد ذلك ، قم بتوصيل القلب المعنق بجهاز Langendorff. استخدم المضخة التمعجية لإجراء التروية بمعدل تدفق ثابت.
في ظل هذه الظروف ، يتسرب المخزن المؤقت إلى القلب. يؤدي هذا إلى ضغط قنية يغلق الصمامات الأبهرية ، مما يتسبب في تحرك العازل عبر الشرايين التاجية. في النهاية ، يخلف المخزن المؤقت عضلات القلب إلى الوراء ثم ينفجر لاحقا عبر الأوردة الرئوية. القلب المتدفق بنجاح جاهز الآن لمزيد من التطبيقات النهائية.
بعد القتل الرحيم لذكر C57BL / 6 يبلغ من العمر 8 إلى 10 أسابيع ، استخدم ملقط الأنسجة لرفع جلد الخنجري. ثم ، باستخدام مقص الأنسجة ، قم بعمل شق جانبي بسيط عبر الجلد. قم بإجراء تشريح حاد بين الجلد واللفافة. قم بتمديد شق الجلد باتجاه الإبط على شكل حرف V على كلا الجانبين واستمر في الشق عبر القفص الصدري.
بعد ذلك ، باستخدام ملقط الأنسجة ، قم بتثبيت القص وتحويل القفص الصدري لأعلى لكشف القلب والرئتين بالكامل. باستخدام ملقط منحني ، انزع التامور. إذا كانت الغدة الصعترية تغطي الأوعية الكبيرة، فاستخدم ملقطين منحنيين لتمزيق الغدة الصعترية باتجاه كلا الجانبين. بعد ذلك ، اسحب قاعدة القلب برفق باتجاه الذيل حتى يظهر الشريان الأورطي وشرايينها الفرعية كوعاء دموي على شكل حرف Y.
قمبعبور الشريان الأورطي في الشريان السباتي المشترك الأيسر. ثم قطع الشريان العضدي. استئصال القلب واغمره على الفور في طبق بتري يحتوي على محلول Tyrode لغسل وضخ الدم المتبقي. ثم انقل القلب إلى طبق بتري آخر يحتوي على محلول 1.
تحت المجهر المجسم ، باستخدام مقص القزحية الناعم ، قم بقص أي أنسجة فائضة. طرد فقاعات الهواء من المحقنة. بعد ذلك ، بمساعدة ملقطين مستقيمين للربط ، قم بإجراء قنية الأبهر الرجعية ، مع الحرص على تنفيذ عملية القصف بأكملها تحت سطح السائل. اضبط عمق القنية بحيث يكون طرف القنية في الشريان الأورطي الصاعد ، مع الحرص على عدم اختراق الصمامات الأبهري.
ثم ، باستخدام خياطة 3-0 قبل العقدة ، اربط الشريان الأورطي إلى شق القنية. حقن المحلول 1 برفق من المحقنة لطرد الدم المتبقي. بعد ذلك ، قم بتوصيل القلب المقنن بجهاز Langendorff ، مع الحرص على عدم إدخال أي فقاعات هواء في القلب. بعد توصيل القلب المقنن بجهاز Langendorff ، قم بتنقية القلب بالمحلول 1 لمدة دقيقتين تقريبا.