لماذا يعد التصوير الطولي مهماً للتحقق من صحة الهدف في الأمراض الأيضية؟

يتيح التصوير الطولي المراقبة المتكررة للديناميكيات الخلوية في نفس الحيوان بمرور الوقت، مما يسمح للباحثين بتقييم ديمومة واتساق التأثيرات التي تتوسطها الأهداف على وظيفة خلايا بيتا وبنية الجزر البنكرياسية، وهو ما يدعم اتخاذ قرارات أكثر ثقة بشأن المضي قدماً أو التوقف في برامج التحقق من الأهداف.

كيف يؤدي عزل جزر البنكرياس من حركة الأمعاء إلى تحسين جودة البيانات؟

تعمل نافذة التصوير المدعومة بصفيحة معدنية على الفصل المكاني بين البنكرياس والأمعاء، مما يقلل من آثار الحركة الناتجة عن الحركة الدودية ويسمح بتصوير مستقر وعالي الدقة للبنى الخلوية، وهو أمر ضروري لإجراء قياسات كمية موثوقة في تطوير المقاييف.

ما هي القياسات الكمية التي تتيح تقييم وظيفة خلايا بيتا في هذا النموذج؟

تتيح هذه الطريقة قياس هجرة خلايا بيتا، وتدفق الكالسيوم داخل الخلايا، وحجم الجزر، والتروية الوعائية من خلال التصوير بنظام الفاصل الزمني (time-lapse) والتصوير المقطعي (z-stack)، مما يوفر قراءات وظيفية تربط التدخلات الجينية أو الدوائية بالنتائج المظهرية في نظامها ذي الصلة بالمرض.

لماذا تعد متطلبات التكرار مهمة للتعاون متعدد الوظائف في المقايسات القائمة على التصوير؟

يضمن التكرار اتساق نتائج التصوير عبر الحيوانات والمشغلين والدورات التجريبية، وهو أمر بالغ الأهمية لبناء الثقة في مخرجات المقايسة وتمكين المقارنة الموثوقة لتأثيرات المركبات بين فرق الاكتشاف والفرق الترجمية والفرق قبل السريرية.

ما هي قدرات التحليل الإحصائي المطلوبة قبل تطبيق التصوير الحي داخل الجسم (intravital imaging) في مسار الاكتشاف؟

يتطلب التنفيذ توفر القدرة على إجراء تحليل كمي للصور، بما في ذلك تتبع شدة الفلورة، وتجزئة الأجسام، وإحصائيات السلاسل الزمنية، لمقارنة الظروف وتقييم أهمية التغيرات الملحوظة في الديناميكيات أو البنية الخلوية.

التصوير داخل الحيوية: طريقة لمراقبة المستوى الخلوي لبنكرياس الفأر من خلال نافذة تصوير مستقرة

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأحياء

0 مشاهدات • 3:40 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتضمن التصوير داخل الحيوية تصور خلايا حي من خلال نافذة تصوير مزروعة في. إنه يتيح المراقبة طويلة المدى للديناميكيات الخلوية دون المساس بوظائفها.

للبدء ، خذ فأرا معدلا وراثيا مخدرا تم زرعه مسبقا بنافذة تصوير البنكرياس مدعومة على صفيحة معدنية. تفصل الصفيحة الأساسية البنكرياس مكانيا عن الأمعاء ، وبالتالي تقلل من القطع الأثرية المتحركة عن الحركات الفسيولوجية مثل التمعج.

يعبر الفأر المعدل وراثيا عن البروتين الفلوري الأخضر أو GFP تحت محفز جين الأنسولين المعبر عنه في خلايا بيتا من الجزر الصغيرة في البنكرياس.

بعد ذلك ، أمسك ذيل الماوس بقوة ورش المطهر لإزالة أي ملوثات سطحية. أدخل قسطرة في وريد الذيل الجانبي. حقن محلول يحتوي على أجسام مضادة موسومة بمسبار فلوري أحمر في الوريد الذيل. ترتبط هذه الأجسام المضادة بالخلايا المبطنة للأوعية الدموية ، مما يؤدي إلى تلطيخها باللون الأحمر.

الآن ، قم بتحويل الماوس إلى إعداد الفحص المجهري داخل الحيوية. أدخل نافذة تصوير البنكرياس في حامل النافذة. ابدأ التصوير تحت تكبير منخفض لتحديد مجموعات الجزر الخضراء الفلورية المحاطة بالأوعية الدموية الحمراء. قم بزيادة التكبير للحصول على تصوير عالي الجودة على المستوى الخلوي لخلايا بيتا الفردية.

ابدأ بتشغيل المجهر داخل الحيوية، بما في ذلك طاقة الليزر. لإدخال قسطرة وعائية ، اضغط على الجانب القريب من الذيل بالسبابة والإصبع الثالث. إذا لزم الأمر ، قم بتسخين الذيل بمصباح. قم بتطهير وريد الذيل برذاذ الإيثانول بنسبة 70٪ ، ثم أدخل قسطرة قياس 30 في وريد الذيل الجانبي وتصور قلس الدم في أنبوب PE-10. ضع شريطا حريريا على القسطرة لتثبيتها.

حقن FITC dextran، و TMR dextran، أو مجسات الفلورسنت الأخرى، حسب الاقتضاء، وفقا لمزيج من مجسات الفلورسنت. أدخل مسبارا للمستقيم للتحكم تلقائيا في درجة حرارة الجسم باستخدام نظام وسادة التدفئة المنزلية. بعد ذلك ، أدخل نافذة تصوير البنكرياس المعدة أثناء إعداد الفحص المجهري داخل الحيوية في حامل النافذة. انقل الماوس من المنصة الجراحية إلى مرحلة التصوير.

لإجراء التصوير داخل الحيوية، ابدأ بتصوير البنكرياس بتكبير منخفض، مثل أربع مرات، لمسح المنظر الكامل للبنكرياس في نافذة تصوير البنكرياس. بمجرد تحديد منطقة الاهتمام ، قم بالتبديل إلى عدسة موضوعية ذات تكبير أعلى ، مثل 20 مرة أو 40 مرة ، لإجراء تصوير على المستوى الخلوي بدقة جانبية ومحورية تبلغ حوالي 0.5 ميكرومتر و 3 ميكرومتر ، على التوالي.

قم بإجراء تصوير z-stack أو تصوير الفاصل الزمني لمراقبة البنية ثلاثية الأبعاد أو ديناميكيات المستوى الخلوي ، مثل ترحيل الخلايا.