التصوير داخل الحيوية: طريقة لمراقبة المستوى الخلوي لبنكرياس الفأر من خلال نافذة تصوير مستقرة

يتضمن التصوير داخل الحيوية تصور خلايا حي من خلال نافذة تصوير مزروعة في. إنه يتيح المراقبة طويلة المدى للديناميكيات الخلوية دون المساس بوظائفها.

للبدء ، خذ فأرا معدلا وراثيا مخدرا تم زرعه مسبقا بنافذة تصوير البنكرياس مدعومة على صفيحة معدنية. تفصل الصفيحة الأساسية البنكرياس مكانيا عن الأمعاء ، وبالتالي تقلل من القطع الأثرية المتحركة عن الحركات الفسيولوجية مثل التمعج.

يعبر الفأر المعدل وراثيا عن البروتين الفلوري الأخضر أو GFP تحت محفز جين الأنسولين المعبر عنه في خلايا بيتا من الجزر الصغيرة في البنكرياس.

بعد ذلك ، أمسك ذيل الماوس بقوة ورش المطهر لإزالة أي ملوثات سطحية. أدخل قسطرة في وريد الذيل الجانبي. حقن محلول يحتوي على أجسام مضادة موسومة بمسبار فلوري أحمر في الوريد الذيل. ترتبط هذه الأجسام المضادة بالخلايا المبطنة للأوعية الدموية ، مما يؤدي إلى تلطيخها باللون الأحمر.

الآن ، قم بتحويل الماوس إلى إعداد الفحص المجهري داخل الحيوية. أدخل نافذة تصوير البنكرياس في حامل النافذة. ابدأ التصوير تحت تكبير منخفض لتحديد مجموعات الجزر الخضراء الفلورية المحاطة بالأوعية الدموية الحمراء. قم بزيادة التكبير للحصول على تصوير عالي الجودة على المستوى الخلوي لخلايا بيتا الفردية.

ابدأ بتشغيل المجهر داخل الحيوية، بما في ذلك طاقة الليزر. لإدخال قسطرة وعائية ، اضغط على الجانب القريب من الذيل بالسبابة والإصبع الثالث. إذا لزم الأمر ، قم بتسخين الذيل بمصباح. قم بتطهير وريد الذيل برذاذ الإيثانول بنسبة 70٪ ، ثم أدخل قسطرة قياس 30 في وريد الذيل الجانبي وتصور قلس الدم في أنبوب PE-10. ضع شريطا حريريا على القسطرة لتثبيتها.

حقن FITC dextran، و TMR dextran، أو مجسات الفلورسنت الأخرى، حسب الاقتضاء، وفقا لمزيج من مجسات الفلورسنت. أدخل مسبارا للمستقيم للتحكم تلقائيا في درجة حرارة الجسم باستخدام نظام وسادة التدفئة المنزلية. بعد ذلك ، أدخل نافذة تصوير البنكرياس المعدة أثناء إعداد الفحص المجهري داخل الحيوية في حامل النافذة. انقل الماوس من المنصة الجراحية إلى مرحلة التصوير.

لإجراء التصوير داخل الحيوية، ابدأ بتصوير البنكرياس بتكبير منخفض، مثل أربع مرات، لمسح المنظر الكامل للبنكرياس في نافذة تصوير البنكرياس. بمجرد تحديد منطقة الاهتمام ، قم بالتبديل إلى عدسة موضوعية ذات تكبير أعلى ، مثل 20 مرة أو 40 مرة ، لإجراء تصوير على المستوى الخلوي بدقة جانبية ومحورية تبلغ حوالي 0.5 ميكرومتر و 3 ميكرومتر ، على التوالي.

قم بإجراء تصوير z-stack أو تصوير الفاصل الزمني لمراقبة البنية ثلاثية الأبعاد أو ديناميكيات المستوى الخلوي ، مثل ترحيل الخلايا.