موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 4:44 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بوضع فأر مخدر في وضع ضعيف. قم بتشريح التجويف الصدري لتصور القلب. استخدم ماصة مزودة بطرف تجويف عريض لتطبيق ضغط الشفط وشفط القلب من جسم الفأر إلى طرفه. استئصال القلب من الشريان الأورطي لحصاده من جسم الفأر.
اغمر القلب المعزول في دورق يحتوي على عازلة غنية بالمغذيات مكملة بعامل مضاد للتخثر. يشكل مضاد التخثر الموجود في المخزن المؤقت مركبا يحتوي على الكالسيوم الموجود في خلايا عضلة القلب - خلايا عضلة القلب ، مما يوقف تقلص عضلات القلب ويمنع تخثر الدم.
بعد ذلك ، ضع جانب قمة القلب لأسفل على حامل قلب محفوظ في طبق بتري يحتوي على عازلة مناسبة. قم بتثبيت الشريان الأورطي فوق الأذينين وانقل القلب المثبت إلى صفيحة التروية.
بعد ذلك ، خذ مجموعة إبرة حقنة تحتوي على مخزن مؤقت مناسب للتروية. أدخل الإبرة في البطين الأيسر التي تخترق حجرة البطين.
مع تثبيت الشريان الأورطي ، يضغط الحقن داخل البطين على الصمامات الأبهرية لفتحها. وبالتالي ، يقوم المخزن المؤقت بتدفق الدم مسبقا عبر الشرايين التاجية ، مما يؤدي إلى حشو عضلات القلب تماما. أخيرا ، ينفجر المخزن المؤقت عبر الأوردة الرئوية. يوفر هذا قلبا منفذا بنجاح للتطبيقات النهائية.
بالنسبة لحصاد قلب الفأر، بعد تأكيد القتل الرحيم وحلق البطن، افتح التجويف الصدري بسرعة لكشف القلب، واستخدم ماصة نقل بلاستيكية مع قطع طرفها إلى حجم القلب تقريبا، لامتصاص القلب في الماصة. ارفع الماصة لتوفير مساحة كافية لإدخال مقص منحني، واستخدم المقص لاستئصال القلب من الجانب الظهري، مع الحرص على تجنب إتلاف الأذينين.
على الفور ، ضع القلب في دورق زجاجي سعة 30 مليلتر يحتوي على CIB EGTA المثلج لمدة دقيقة واحدة تقريبا. عندما تتوقف الانقباضات ، ضع القلب في طبق مزرعة سعة 35 مليلتر يحتوي على CIB EGTA المثلج ، وقم بإزالة الرئة والأنسجة المرئية الأخرى.
ضع القلب الذي تم تنظيفه تقريبا على حامل قلب مليء ب CIB EGTA المبرد ، بحيث يكون جانب القمة لأسفل ، وضع الحامل تحت مجهر مجسيم. قم بإزالة الدهون والأنسجة الضامة من حول الشريان الأورطي. إذا كان طول الشريان الأورطي المقطوع طويلا جدا ، فقم بقص الشريان الأورطي أسفل الشريان العضدي الرأسي مباشرة ، وقم بتوجيه القلب بحيث يكون السطح الأمامي متجها للأمام. استخدم الملقط لرفع نهاية الشريان الأورطي ، واستخدم مشبك وعائي صغير لتثبيت الشريان الأورطي بالقرب من الأذينين ، مع الضغط برفق على الأذينين.
بعد ذلك ، ضع القلب المثبت على صفيحة التروية ، بحيث يكون الجانب الأمامي متجها لأعلى ، وترطيب القلب ببضع قطرات من CIB EGTA. بالنسبة للتروية القبلية ، قم بتحميل حقنة سعة 20 مل تحتوي على CIB EGTA مسخن مسبقا متصلة بأنبوب تمديد مرن وإبرة حقن ملحوظة ، على مضخة التسريب ، وابدأ تشغيل المضخة بمعدل تدفق 0.5 مليلتر في الدقيقة. عندما تمتلئ الإبرة والمضخة ، ضع إبرة الحقن على لوحة التروية ، مع الجانب الأقصر من الشكل القطري في المقدمة ، وحرك الإبرة حتى تلامس قمة القلب.
بعناية ، أدخل الإبرة بالقرب من قمة البطين الأيسر ، في حجرة البطين دون التواء أو فصل الإبرة عن اللوحة ، ومراقبة العلامة لتقدير عمق إدخال الإبرة. عند اكتمال إدخال الإبرة ، يجب أن يبدأ الدم في التدفق من الشريان التاجي.
استخدم شريطا لتثبيت إبرة الحقن على اللوحة وزيادة سرعة المضخة إلى 1 مليلتر في الدقيقة. إذا تم نفخ القلب بنجاح ، فيجب أن يكون تدفق المخزن المؤقت في الشعيرات الدموية مرئيا أسفل النخاب.