JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء
0 مشاهدات • 4:00 د • July 8th, 2025
أثناء الحالات المرضية ، يتسبب ضعف حاجز الوصلة الظهارية المعوية الضيق في زيادة تغلغل المحتويات اللمعية الضارة في الدورة الدموية الجهازية ، مما يؤدي إلى زيادة الالتهاب الجهازي.
لتقييم نفاذية الأمعاء عن طريق إنشاء حلقة القولون القريبة المعوية أو نموذج pcLoop ، قم بإعداد فأر مخدر في وضع ضعيف. إجراء شق في خط الوسط. قم بإخراج الأعور برفق ، والدقاق الطرفي ، والقولون القريب ، ووضعه فوق شاش مبلل للحفاظ على ترطيب الأعضاء.
حدد موقع القولون المتوسط القريب — طيات غشائية من الصفاق تحتوي على أوعية دموية. تحديد موقعين منفصلين بشكل مناسب في القولون المتوسط الخاليين من الأوعية الدموية ، بعيدا عن الأعور ، المراد ربطهما. ثقب المواقع.
إنشاء الرباط في المواقع المحددة ، وعمل شقوق بالقرب من المواقع المربوطة لعزل جزء pcLoop دون إزعاج إمدادات الدم. اغسل القطعة بمخزن مؤقت لإزالة أي براز.
اربط الأطراف المقطوعة جراحيا للجزء المتدفق. حقن محلول علامة الفلورسنت المطلوب في تجويف قطعة القولون. أعد الأعضاء إلى تجويف البطن. أغلق الشق الجراحي واترك الفأر يتعافى.
بعد الحقن ، يسهل انخفاض سلامة الحاجز المعوي زيادة النقل شبه الخلوي لجزيئات علامة الفلورسنت من تجويف الأمعاء إلى الدورة الدموية ، والتي يمكن اكتشافها في جزء الدم المصلي لقياس نفاذية الأمعاء.
جهز الفأر للجراحة وقم بإخراج الستر. باستخدام مسحات قطنية مبللة ، قم بإخراج الدقاق بالكامل وضعه فوق شاش قطني مبلل. تحديد القولون القريب في إمدادات الدم الموجودة في القولون المتوسط. قم بتعبئة القولون القريب ، وإنشاء أول رباط في منطقة خالية من الأوعية في القولون المتوسط ، على بعد حوالي 0.5 سم من العصير.
قم بقياس 2 سم من الرباط الأول ، وقم بإنشاء رباط ثان في منطقة خالية من إمدادات الدم في القولون المتوسط. باستخدام مقص ناعم ، قم بقص بعناية بجوار كل ربط لعزل pcLoop بطول 2 سم.
اغسل pcLoop برفق باستخدام HBSS دافئ لإزالة البراز باستخدام أنبوب تغذية أصفر مرن متصل بحقنة سعة 10 ملليلتر. تأكد من طرد المحتويات اللمعية من تجويف البطن للحفاظ على نظافة موقع الجراحة. بعد ذلك ، قم بربط الطرفين المقطوعين من pcLoop المتدفق باستخدام خياطة الحرير.
استخدم حقنة سعة 1 مليلتر بإبرة قياس 30 لحقن 200 ميكرولتر من الكاشف ببطء مثل FITC-dextrans أو chemokine في تجويف الأمعاء. سوف ينتفخ pcLoop ، مما يتسبب في انتفاخ معتدل في الغشاء المخاطي. استخدم مسحات قطنية مبللة لإعادة pcLoop ، الدقاق ، والغدب برفق. أغلق جدار البطن باستخدام حامل إبرة ، وملقط تشريحي ، و 3.0 خيوط حريرية غير قابلة للامتصاص بإبرة قطع عكسية.