عزل الألياف العضلية : تقنية للحصول على الألياف العضلية المفردة من عضلات الباسطة الفأر المحصودة Digitorum Longus (EDL)

ابدأ بفأر قتل رحيم في وضع الاستلقاء. تعقيم طرفها الخلفي. قم بإزالة الجلد واللفافة جراحيا - غلاف رقيق من النسيج الضام تحت الجلد - لكشف عضلات الأطراف الخلفية الأساسية.

حدد موقع عضلة الظنبوب الأمامية أو العضلة TA على الجانب الجانبي من الساق. عقد الوتر البعيد TA ، افصل العضلة عن الأنسجة الأساسية. اقطع العضلة بالقرب من الركبة لاستئصال عضلة TA ، مما يكشف عن العضلة الباسطة الأساسية أو العضلة الطويلة أو EDL الموجودة في الحيز الأمامي للطرف الخلفي.

شق وتر EDL البعيد واسحب عضلة EDL نحو الركبة. قطع وتر EDL القريب لاستئصال عضلة EDLE. انقل العضلة المحصودة إلى أنبوب به وسائط دافئة تحتوي على إنزيمات الكولاجيناز واحتضانها للمدة المناسبة. الكولاجيناز يكسر النسيج الضام المحيط بكل ألياف عضلية أو الألياف العضلية داخل العضلات. تعمل خطوة الهضم هذه على إرخاء الألياف العضلية من الطبقة الداخلية للعضلة.

بعد الحضانة ، انقل العضلات المهضومة بعناية إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسائط دافئة مسبقا لزيادة معدل بقاء الألياف العضلية. انقل اللوحة إلى المرحلة الساخنة من مجهر ستيريو. الآن ، قم بتقطيع العضلات المهضومة برفق لفصل الألياف العضلية الفردية وتحريرها في المحلول.

يمكن استخدام الألياف العضلية المعزولة EDL لمزيد من التحليل النهائي.

رش جميع المعدات والأطراف الخلفية للفأر بنسبة 70٪ من الإيثانول. استخدم مقصا منحنيا دقيقا وملقطا دقيقا لإزالة الجلد وفضح العضلات الأساسية. قم بإزالة اللفافة المحيطة بالملقط المنحني الدقيق دون الإضرار بالعضلات الأساسية.

لإزالة الظنبوب الأمامي أو TA ، أمسك وتر TA البعيد بالملقط ، واقطعه بمقص ناعم. أثناء الإمساك ب TA في الوتر ، اسحبه نحو الركبة واقطع العضلة بالقرب من الركبة لكشف عضلة EDLE.

ارفع وتر EDL البعيد بملقط منحني ، واقطع بمقص زنبركي Vannas ناعم. كشف وتر EDL القريب عن طريق سحب EDL بعناية نحو الركبة. ثم قطع الوتر القريب بالمقص. احتضان عضلات كهرباء لبنان في أنبوب التفاعل عند 37 درجة مئوية في حمام مائي دائري. أوقف عملية الهضم عندما ترتخي العضلات وتظهر الألياف العضلية المفردة.

العمل تحت مجهر مجهر استريو ، مزود بلوحة تسخين ، يغسل العضلات بوسط عزل دافئ ، باستخدام ماصة التجويف الكبيرة. افصل العضلات عن الماصة ذات التجويف الكبير ، حتى يطفو العدد المطلوب من الألياف العضلية بحرية في المحلول.