عزل خلايا IPE و RPE: تقنية للحصول على الخلايا الظهارية الصبغية العيني من عين الأرنب

الخلايا الظهارية الصبغية عبارة عن خلايا مكعبة متمايزة نهائيا متصلة بتقاطعات ضيقة. هذه الخلايا الظهارية المبطنة للقزحية هي الخلايا الظهارية أو الخلايا الظهارية أو IPE الصبغية ، وتلك القريبة من شبكية العين هي الخلايا الظهارية الصبغية أو RPE.

لاستخراج هذه الخلايا ، خذ عين أرنب سليمة. عالج العين بمطهر لإزالة أي كائنات دقيقة من سطح العين. اغسل المطهر بمحلول عازل. قم بعمل شق بالقرب من القزحية. باستخدام هذه الفتحة ، قم بعمل قطع دائري كامل على طول حدود القزحية ، وتقسيم العين إلى جزء أمامي يحتوي على قزحية وجزء خلفي يتكون من شبكية العين والخلط الزجاجي.

خذ الجزء الأمامي وتخلص من العدسة للوصول إلى القزحية. قم بإزالة القزحية وضعها في طبق ثقافة. بعد ذلك ، خذ الجزء الخلفي وتخلص من الخلط الزجاجي الجيلاتيني وشبكية العين من بصلة العين.

عالج القزحية وبصلة العين بالتربسين واحتضنها. يحلل التربسين الوصلة الضيقة وبروتينات المصفوفة خارج الخلية ، مما يؤدي إلى تفكك الخلايا الظهارية. تخلص من التربسين وأضف وسيطا مناسبا للثقافة. اكشط القزحية وسطح بصلة العين برفق لتحرير الخلايا الظهارية في الوسط.

أخيرا ، قم بزرع خلايا IPE و RPE في آبار منفصلة. الخلايا جاهزة لمزيد من المقايسات النهائية.

بعد القتل الرحيم للحيوان ، استخدم مقصا منحنيا وملقط كوليبري لاستئصال العينين ، ثم نظف الأنسجة العضلية والجلد المتبقي من العينين